Zalety i wady wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej (MLSM)
Wielofotonowa laserowa mikroskopia skaningowa jest metodą eksperymentalną opartą na technologii laserowej mikroskopii skaningowej, która zapewnia lepsze możliwości optycznego przekroju w przypadku obserwacji trójwymiarowych. Metoda wielofotonowego wzbudzania fluorescencji wykorzystuje światło czerwone o dużej długości lub światło bliskiej podczerwieni do zbierania obrazów fluorescencyjnych próbek o wysokiej rozdzielczości, co powoduje minimalne uszkodzenia żywych okazów. Dlatego nadaje się do obrazowania żywych komórek, szczególnie grubych żywych tkanek, takich jak wycinki mózgu, zarodki itp. Badania obrazowe całych narządów, a nawet całych ciał.
Zalety są następujące:
1. Do wzbudzenia użyj światła czerwonego lub światła podczerwonego, a rozpraszanie światła jest małe (rozpraszanie małych cząstek jest odwrotnie proporcjonalne do czwartej potęgi długości fali).
2. Nie jest potrzebna dziurka i można zebrać więcej rozproszonych fotonów z przekroju obrazowania.
3. Otwór nie jest w stanie rozróżnić rozproszonych fotonów emitowanych z obszaru rozogniskowanego lub obszaru ostrości, a stosunek sygnału do szumu w obrazowaniu wielofotonowym w głębokich warstwach jest dobry.
4. Światło ultrafioletowe lub widzialne stosowane do wzbudzenia pojedynczych fotonów jest łatwo absorbowane i tłumione przez próbkę, zanim wiązka dotrze do płaszczyzny ogniskowej, i trudno jest wzbudzić głębokie warstwy.
5. Podczas obserwacji pod mikroskopem biologicznym należy przede wszystkim zadbać o to, aby nie uszkodzić aktywnego stanu samego organizmu i utrzymać przepływ wody, stężenia jonów, tlenu i składników odżywczych. W przypadku obserwacji światła zarówno energia cieplna, jak i fotonowa musi mieścić się w zakresie ilości napromieniowania, a energia świetlna, aby komórki nie uległy uszkodzeniu.
6. Mikroskopia wielofotonowa ma również wiele zalet. Na przykład pod względem rozdzielczości trójwymiarowej, penetracji głębokości, wydajności rozpraszania, światła tła, stosunku sygnału do szumu, kontroli itp. istnieją cechy transcendentne, których poprzednie mikroskopy laserowe nie miały lub nie mogły dorównać.
Wielofotonowa konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa została rozszerzona na różne dziedziny badań i zastosowań. Może prowadzić trójwymiarową, nieniszczącą obserwację próbek w ich naturalnym stanie i może poprawić rozdzielczość i stosunek sygnału do szumu systemu. Stosowanie materiałów do wzbudzania wielofotonowego Zmiany właściwości mogą również umożliwiać trójwymiarowe przechowywanie danych o wysokości i trójwymiarową mikroobróbkę w dowolnym kierunku, co ma wysoką wartość aplikacyjną. Uważa się, że wraz z dalszym rozwojem maszyn, materiałów, technologii laserowej itp. związanych z wielofotonową mikroskopią konfokalną, coraz więcej fotonicznej konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej zyska większy rozwój i szersze zastosowanie.
Wady są następujące:
1. Może obrazować jedynie fluorescencję.
2. Jeżeli próbka zawiera chromofory, które mogą pochłaniać światło wzbudzające, takie jak pigmenty, próbka może zostać uszkodzona pod wpływem ciepła.
3. Rozdzielczość jest nieco zmniejszona. Chociaż można to poprawić, stosując jednocześnie otwory konfokalne, nastąpi utrata sygnału.
4. Koszt wielofotonowych mikroskopów skaningowych, ograniczony przez drogie, ultraszybkie lasery, jest stosunkowo wysoki.
