Oznaczanie populacji drobnoustrojów - bezpośrednia metoda liczenia mikroskopowego!
I. Cel Wymagania
1, Aby wyjaśnić zasadę liczenia płytek hematokrytowych.
2. Opanuj metodę liczenia drobnoustrojów przy użyciu płytki hematokrytowej.
II. Podstawowe zasady
Mikroskopowa metoda liczenia bezpośredniego polega na tym, że niewielka ilość zawiesiny badanej próbki znajduje się na specjalnym szkiełku o określonej powierzchni i objętości (zwanym również licznikiem bakteriologicznym), w mikroskopie zliczanie bezpośrednie jest metodą prostą, szybką i intuicyjną. Obecnie powszechnie stosowanymi licznikami bakteriologicznymi krajowymi i zagranicznymi są: płytka do liczenia krwinek, liczniki bakteriologiczne Peteroffa-Hausera i liczniki bakteriologiczne Hawksleya itp., które można stosować do drożdży, bakterii, zarodników pleśni i innych zawiesin zliczania, podstawowa zasada Jest taki sam. Dwa ostatnie typy liczników mają całkowitą objętość 0.02 mm3 po nałożeniu szkiełka nakrywkowego, a odległość między szkiełkiem nakrywkowym a plasterkiem nośnym wynosi tylko 0,02 mm, więc mniejsze komórki, takie jak bakterie można obserwować i policzyć za pomocą obiektywu zanurzeniowego w oleju. Oprócz stosowania tych liczników, istnieje również metoda szacowania stosunku powierzchni rozmazu do pola widzenia obserwowanego bezpośrednio pod mikroskopem, powszechnie stosowana w badaniach bakteriologicznych mleka krowiego. Zaletą metody liczenia bezpośredniego pod mikroskopem jest intuicyjność, szybkość i łatwość obsługi. Jednak wadą tej metody jest to, że wynikiem jest zwykle suma organizmów martwych i żywych. Istnieją pewne metody przezwyciężenia tej wady, takie jak połączenie hodowli mikrokomorowej barwionej żywymi bakteriami (krótki czas) z dodatkiem inhibitorów cytokinezy, aby osiągnąć cel polegający na liczeniu wyłącznie żywych organizmów.
Kroki operacji
1, Przygotowanie zawiesiny bakteryjnej
Do sporządzenia zawiesiny bakteryjnej drożdży piwnych o odpowiednim stężeniu należy użyć sterylnej soli fizjologicznej.
2, Lustrzana komora zliczania
Przed dodaniem próbek należy najpierw sprawdzić komorę zliczeniową płytki zliczającej. Jeśli jest jakiś brud, należy go oczyścić i wysuszyć przed zliczeniem.
3, Dodawanie próbek
Oczyścić i osuszyć płytkę do liczenia krwinek przykrytą szkiełkiem nakrywkowym, a następnie za pomocą sterylnej biurety kapilarnej wytrząsnąć zawiesinę drożdży piwnych z krawędzi szkiełka nakrywkowego w celu upuszczenia małej kropli, tak aby płyn bakteryjny wzdłuż szczeliny wnikał kapilarnie do komora zliczająca automatycznie, zazwyczaj komorę zliczającą można napełnić płynem bakteryjnym. Podczas pobierania próbek roztwór bakteryjny należy najpierw dobrze wstrząsnąć; podczas dodawania próbek w komorze zliczającej nie powinny znajdować się pęcherzyki powietrza.
4, liczenie mikroskopu
Po dodaniu próbki odczekaj 5 minut, następnie umieść płytkę do liczenia krwinek na stoliku nośnym mikroskopu, najpierw znajdź lokalizację komory zliczającej przy małym powiększeniu, a następnie zmień ją na duże powiększenie w celu zliczenia. Dostosuj odpowiednio natężenie światła mikroskopu, gdyż mikroskop z reflektorem powinien również zwracać uwagę, aby światło nie było przesunięte w jedną stronę, w przeciwnym razie pole widzenia nie jest łatwe do wykreślenia wyraźną linią siatki komory zliczającej, lub widzieć tylko linię pionową lub tylko linię poziomą. Jeżeli przed zliczeniem okaże się, że płyn bakteryjny jest za gęsty lub za rzadki, konieczne jest ponowne dostosowanie rozcieńczenia przed zliczeniem. Odpowiednie są ogólne wymagania dotyczące rozcieńczenia próbki wynoszące około 5 do 10 bakterii w każdej komórce. Dla każdej komory zliczającej do liczenia wybiera się organizmy z 5 środkowych przedziałów (4 rogi i jeden środkowy przedział pośrodku). Organizmy znajdujące się na liniach siatki są zwykle liczone tylko na linii górnej i prawej. W przypadku pączkowania drożdży, gdy pączkujący korpus osiąga połowę wielkości komórki macierzystej, liczy się go jako dwa organizmy. Zliczanie próbki z dwóch komór zliczających do wartości średniej w celu obliczenia zawartości bakterii w próbce.
5. Czyszczenie płytki hematokrytowej
Po użyciu płytkę do liczenia krwinek należy opłukać wodą pod kranem, do mycia i szczotkowania nie używać twardych przedmiotów, samodzielnie ją wysuszyć lub po umyciu wysuszyć suszarką do włosów. Sprawdź mikroskopowo płytkę, aby sprawdzić, czy w każdym przedziale znajdują się jakiekolwiek pozostałości organizmów lub inne osady. Jeśli nie jest czysty, pranie należy powtarzać, aż będzie czyste.
