Różnica między mikroskopem fluorescencyjnym a laserowym mikroskopem konfokalnym
mikroskop fluorescencyjny
1. Mikroskop fluorescencyjny wykorzystuje światło ultrafioletowe jako źródło światła, które służy do napromieniowania wykrytego obiektu w celu wyemitowania przez niego fluorescencji, a następnie obserwacji kształtu i położenia obiektu pod mikroskopem. Mikroskop fluorescencyjny służy do badania absorpcji, transportu, dystrybucji i lokalizacji substancji chemicznych w komórkach. Niektóre substancje w komórkach, takie jak chlorofil, mogą fluoryzować po napromieniowaniu promieniami ultrafioletowymi; Inne substancje nie mogą same fluorescjonować, ale mogą fluorescować po zabarwieniu barwnikami fluorescencyjnymi lub przeciwciałami fluorescencyjnymi i napromieniowaniu promieniami ultrafioletowymi. Mikroskop fluorescencyjny jest jednym z narzędzi do badań jakościowych i ilościowych tych substancji.
2, zasada mikroskopu fluorescencyjnego:
(a) Źródło światła: Źródło światła emituje światło o różnych długościach fal (od ultrafioletu do podczerwieni).
(b) Źródło światła z filtrem wzbudzenia: przepuszcza światło o określonej długości fali, które może wywołać fluorescencję próbki, blokując jednocześnie światło, które jest bezużyteczne dla fluorescencji wzbudzenia.
(c) Próbki fluorescencyjne: zazwyczaj barwione pigmentami fluorescencyjnymi.
(d) Filtr blokujący: blokujący światło wzbudzające, które nie zostało zaabsorbowane przez próbkę w celu selektywnego przesyłania fluorescencji, a niektóre długości fal fluorescencji są również selektywnie transmitowane. Mikroskop wykorzystujący światło ultrafioletowe jako źródło światła, aby napromieniowany obiekt emitował fluorescencję. Mikroskop elektronowy został po raz pierwszy zmontowany przez Knohla i Ha Roskę w Berlinie w 1931 roku. W mikroskopie tym zamiast wiązki światła zastosowano wiązkę elektronów o dużej prędkości. Ponieważ długość fali przepływu elektronów jest znacznie krótsza niż fali świetlnej, powiększenie mikroskopu elektronowego może sięgać 800 tysięcy razy, a minimalna rozdzielczość wynosi 0,2 nanometra. Skaningowy mikroskop elektronowy, który zaczęto stosować w 1963 roku, pozwala ludziom dostrzec maleńkie struktury na powierzchni przedmiotów.
3. Zakres zastosowania: służy do powiększania obrazu drobnych obiektów. Jest powszechnie stosowany do obserwacji biologii, medycyny i mikroskopijnych cząstek.
Mikroskop konfokalny
1. Mikroskop konfokalny dodaje na drodze optycznej światła odbitego półodblaskową półsoczewkę, która załamuje odbite światło, które przeszło przez soczewkę w innych kierunkach. W jego ognisku znajduje się przegroda z otworkiem, a otworek znajduje się w ognisku. Za przegrodą znajduje się fotopowielacz. Można sobie wyobrazić, że światło odbite przed i po skupieniu światła detekcyjnego przechodzi przez ten układ konfokalny i nie będzie skupione na małym otworze, ale zostanie zablokowane przez przegrodę. Zatem fotometr mierzy intensywność światła odbitego w ognisku.
2. Zasada: Tradycyjny mikroskop optyczny wykorzystuje źródło światła polowego, a obraz każdego punktu próbki będzie zakłócany przez dyfrakcję lub rozproszone światło sąsiednich punktów; Laserowy skaningowy mikroskop konfokalny skanuje każdy punkt płaszczyzny ogniskowej próbki, wykorzystując punktowe źródło światła utworzone przez wiązkę lasera przechodzącą przez otworek oświetlający. Napromieniowany punkt próbki jest obrazowany w otworku detekcyjnym, który po wykryciu otworka jest odbierany punkt po punkcie lub linia po punkcie przez fotopowielacz (PMT) lub urządzenie ze sprzężeniem zimnym (ccCCD), a obraz fluorescencyjny jest szybko tworzony na ekranie monitora komputera. Otwór oświetleniowy i otworek detekcyjny są sprzężone w odniesieniu do płaszczyzny ogniskowej soczewki obiektywu, a punkty na płaszczyźnie ogniskowej skupiają się jednocześnie na otworku oświetleniowym i otworku emisyjnym, a punkty poza płaszczyzną ogniskowej nie będą być zobrazowany w otworku detekcyjnym, tak aby uzyskany obraz konfokalny był optycznym przekrojem próbki, co eliminuje wadę rozmytego obrazu w zwykłym mikroskopie.
3. Obszary zastosowań: medycyna, badania nad zwierzętami i roślinami, biochemia, bakteriologia, biologia komórki, tkanki i zarodki, nauka o żywności, genetyka, farmakologia, fizjologia, optyka, patologia, botanika, neuronauka, biologia morska, materiałoznawstwo, elektronika, mechanika, geologia naftowa i mineralogia.
