Bezpośrednie liczenie mikrobiologiczne pod mikroskopem
Powszechnie stosowaną metodą liczenia drobnoustrojów jest bezpośrednie zliczanie pod mikroskopem przy użyciu płytki hematokrytowej. Zaletą tej metody jest to, że jest intuicyjna i szybka. Odpowiednio rozcieńczoną zawiesinę bakterii (lub zawiesinę zarodników) umieszcza się w komorze zliczania pomiędzy szkiełkiem a szkiełkiem nakrywkowym płytki hematokrytowej i zlicza pod mikroskopem. Ponieważ objętość komory zliczającej jest stała (0,1 mm2), liczbę mikroorganizmów obserwowanych pod mikroskopem można przeliczyć na całkowitą liczbę mikroorganizmów na jednostkę objętości. Metoda ta jest również znana jako całkowite liczenie bakterii, ponieważ liczy sumę organizmów żywych i martwych.
Płytka hematokrytowa, zwykle specjalny preparat z trzema platformami składającymi się z czterech szczelin. Środkowa platforma jest podzielona na dwie połowy krótkim poziomym rowkiem, po każdej stronie platformy wygrawerowana jest kwadratowa siatka, każda kwadratowa siatka jest podzielona w sumie na dziewięć dużych kwadratów, środek dużego kwadratu, który jest komorą zliczania liczenie drobnoustrojów odbywa się w komorze zliczania. Płytkę do liczenia krwi pokazano na rycinie VIII-1.
Skala komory zliczającej ma zazwyczaj dwa rozmiary: jeden, w którym duży kwadrat jest podzielony na 16 średnich kwadratów, z których każdy jest podzielony na 25 małych kwadratów (rysunek VIII-2), a drugi, w którym duży kwadrat jest podzielony na 25 średnich kwadratów, z których każdy jest podzielony na 16 małych kwadratów (rysunek VIII-1, C). Jednakże liczba małych kwadratów w każdym dużym kwadracie jest taka sama dla obu rozmiarów planszy do liczenia, tj. 16 × 25=400 małych kwadratów, jak na rysunku VIII-2.
Długość boku każdego dużego kwadratu wynosi 1 mm, zatem powierzchnia każdego dużego kwadratu wynosi 1 mm2, a po zakryciu szkiełka nakrywkowego wysokość pomiędzy szkiełkiem nakrywkowym wynosi 0,1 mm, więc objętość komora zliczająca wynosi 0,1 mm3.
Podczas liczenia zwykle należy policzyć całkowitą liczbę bakterii w pięciu środkowych kwadratach, a następnie uzyskać średnią wartość z każdego środkowego kwadratu, następnie pomnożyć ją przez 16 lub 25, aby otrzymać całkowitą liczbę bakterii w jednym dużym kwadracie, a następnie przeliczyć ją na całkowita liczba bakterii w 1 ml roztworu bakteryjnego.
