Mikroskopy fluorescencyjne można podzielić na dwa typy ze względu na zasadę drogi światła:
1. Transmisyjny mikroskop fluorescencyjny
W starszych mikroskopach fluorescencyjnych źródło światła wzbudzającego przechodzi przez materiał próbki przez kondensator, aby wzbudzić fluorescencję. Zaletą jest to, że fluorescencja jest silna przy małym powiększeniu, ale wadą jest to, że fluorescencja słabnie wraz ze wzrostem powiększenia. Dlatego nadaje się tylko do obserwacji większych próbek materiałów.
2. Mikroskopia epifluorescencyjna
Światło wzbudzające pada z soczewki obiektywu na powierzchnię próbki, co oznacza, że ta sama soczewka obiektywu jest używana jako kondensor oświetlenia i soczewka obiektywu do zbierania fluorescencji.
Do ścieżki optycznej ustawionej pod kątem 45° do osi optycznej należy dodać dichroiczny rozdzielacz wiązki (lustro dichroiczne). Światło wzbudzenia odbija się od soczewki obiektywu i skupia na próbce. Fluorescencja generowana przez próbkę odbija się od powierzchni soczewki obiektywu i osłony. Światło wzbudzenia odbite od powierzchni szkiełka wchodzi jednocześnie do soczewki obiektywu i powraca do dichroicznego rozdzielacza wiązki, aby oddzielić światło wzbudzenia od fluorescencji. Pozostałe światło wzbudzenia jest następnie pochłaniane przez filtr blokujący. Jeśli używasz różnych wkładów z filtrem wzbudzenia/dwukolorowym rozdzielaczem wiązki/filtrem blokującym, możesz zaspokoić potrzeby różnych produktów reakcji fluorescencji.
Zaletą tego rodzaju mikroskopu fluorescencyjnego jest to, że pole widzenia jest równomiernie oświetlone, obraz jest wyraźny, a im większe powiększenie, tym silniejsza fluorescencja.
Jakie są główne kategorie mikroskopów optycznych?
1. Zwykły mikroskop optyczny
Zwykłe mikroskopy optyczne składają się głównie z następujących części: układu oświetlenia, w skład którego wchodzi źródło światła i kondensator; system powiększenia optycznego, który składa się z obiektywu i okularu. Jest to najważniejsza część mikroskopu i została zaprojektowana tak, aby uniknąć nadmiernej aberracji sferycznej i aberracji chromatycznej, zarówno okular, jak i soczewka obiektywu składają się ze złożonych grup soczewek.
2. Laserowy konfokalny mikroskop skaningowy
Laserowy konfokalny mikroskop skaningowy wydaje się bardzo zaawansowany i skomplikowany. W rzeczywistości wykorzystuje po prostu laser jako skaningowe źródło światła do szybkiego skanowania i obrazowania obiektów punkt po punkcie, linia po linii i powierzchnia po powierzchni.
Biorąc pod uwagę krótszą długość fali wiązki laserowej, sama wiązka jest bardzo cienka, co określa, że konfokalny laserowy mikroskop skaningowy ma wysoką rozdzielczość, około trzykrotnie większą niż zwykły mikroskop optyczny. Ten typ mikroskopu służy do obserwacji morfologii komórek i ilościowej analizy wewnątrzkomórkowych składników biochemicznych oraz pomiaru morfologii komórek.
3. Mikroskop ciemnego pola
W środku kondensora mikroskopu z ciemnym polem znajduje się płytka świetlna, która zapobiega przedostawaniu się światła oświetlającego bezpośrednio do obiektywu. Tylko światło odbite i ugięte przez próbkę może przedostać się do soczewki obiektywu. Dlatego tło pola widzenia jest czarne, a krawędzie obiektów jasne.
