Metoda wykrywania metodą mikroskopii fluorescencyjnej
mikroskop fluorescencyjny
Mikroskopia fluorescencyjna jest podstawowym narzędziem cytochemii immunofluorescencyjnej. Składa się z głównych elementów, takich jak źródło światła, układ płytek filtrujących i układ optyczny. Wykorzystuje światło o określonej długości fali do wzbudzenia próbki i emisji fluorescencji, która jest powiększana przez system obiektywu i okularu w celu obserwacji obrazu fluorescencyjnego próbki (rysunek 1).
(1) Źródło światła
Obecnie jako źródło światła powszechnie stosuje się ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową o mocy 200 W. Wykonany jest ze szkła kwarcowego, ma kulisty kształt pośrodku i wypełnioną wewnątrz pewną ilością rtęci. Podczas pracy wyładowanie pomiędzy dwiema elektrodami powoduje odparowanie rtęci, a ciśnienie wewnątrz kuli gwałtownie wzrasta. Kiedy rtęć całkowicie wyparuje, może osiągnąć 50-70 standardowe ciśnienie atmosferyczne, co zwykle zajmuje około 5-15 minut. Luminescencja ultrawysokoprężnych lamp rtęciowych jest wynikiem wyładowania pomiędzy elektrodami, które w sposób ciągły dysocjuje i redukuje cząsteczki rtęci oraz emituje fotony. Emituje silne światło ultrafioletowe i niebieskofioletowe, które jest wystarczające do wzbudzenia różnych substancji fluorescencyjnych, dlatego jest szeroko stosowany w mikroskopach fluorescencyjnych.
Środki ostrożności podczas korzystania z mikroskopu fluorescencyjnego
(1) Należy ściśle przestrzegać instrukcji producenta mikroskopu fluorescencyjnego i nie zmieniać samowolnie programu.
(2) Kontrolę należy przeprowadzić w ciemnym pomieszczeniu. Po wejściu do ciemni podłącz zasilanie i zapal ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową na 5-15 minut. Gdy źródło światła wyemituje mocne światło i ustabilizuje się, oczy powinny w pełni przyzwyczaić się do ciemni przed rozpoczęciem obserwacji preparatu.
(3) Aby zapobiec uszkodzeniu oczu przez promieniowanie UV, podczas regulacji źródła światła należy nosić okulary ochronne.
(4) Czas kontroli za każdym razem powinien wynosić 1-2 godzin. Jeśli przekroczy 90 minut, natężenie światła ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej stopniowo maleje, a fluorescencja słabnie; Próbki wystawione na działanie promieniowania ultrafioletowego przez 3-5 dni
Po minucie fluorescencja również znacząco spadła; Zatem maksymalny czas trwania nie powinien przekraczać 2-3 godzin.
(5) Żywotność źródła światła mikroskopu fluorescencyjnego jest ograniczona, a próbkę należy badać centralnie, aby zaoszczędzić czas
Oszczędzaj czas i chroń źródło światła. Gdy jest gorąco, należy dodać wentylator elektryczny, aby rozproszyć ciepło i ochłodzić. Przy wymianie nowej żarówki należy od początku odnotować czas użytkowania. Gdy latarka jest wyłączona i chcesz ją ponownie włączyć, przed jej zapaleniem należy odczekać, aż żarówka wystarczająco ostygnie. Unikaj zapalania źródła światła kilka razy dziennie.
(6) Obserwować próbkę natychmiast po zabarwieniu, ponieważ fluorescencja z czasem będzie stopniowo słabnąć. Jeśli próbka jest przechowywana w plastikowej torbie polietylenowej w temperaturze 4 stopni, może to opóźnić czas tłumienia fluorescencji i zapobiec odparowaniu środka zamykającego.
(7) Kryteria oceny jasności fluorescencji są ogólnie podzielone na cztery poziomy, a mianowicie „jeden” – brak lub widoczna słaba fluorescencja. „+” – Widoczna jest tylko widoczna fluorescencja. ++- Widoczne przy jasnej fluorescencji. „+++” – Widoczna i oślepiająca fluorescencja.
