Czym mikroskopia fluorescencyjna różni się od konfokalnej mikroskopii laserowej
Mikroskop fluorescencyjny
1. Mikroskop fluorescencyjny wykorzystuje światło ultrafioletowe jako źródło światła do oświetlania badanego obiektu w celu wyemitowania fluorescencji, a następnie obserwuje kształt i położenie obiektu pod mikroskopem. Mikroskopia fluorescencyjna służy do badania absorpcji i transportu substancji w komórkach, a także dystrybucji i położenia substancji chemicznych. Niektóre substancje w komórkach, takie jak chlorofil, mogą fluoryzować po napromieniowaniu promieniami ultrafioletowymi; niektóre substancje same w sobie nie mogą fluorescować, ale jeśli zostaną zabarwione barwnikami fluorescencyjnymi lub przeciwciałami fluorescencyjnymi, mogą fluorescować po napromieniowaniu promieniami ultrafioletowymi. Mikroskopia fluorescencyjna jest jednym z narzędzi do jakościowych i ilościowych badań tego typu substancji.
2. Zasada mikroskopu fluorescencyjnego:
(A) Źródło światła: Źródło światła emituje światło o różnych długościach fal (od ultrafioletu do podczerwieni).
(B) Źródło światła z filtrem wzbudzającym: przepuszcza światło o określonej długości fali, które może wywołać fluorescencję próbki, blokując jednocześnie światło, które nie jest przydatne do stymulowania fluorescencji.
(C) Próbki fluorescencyjne: Zwykle barwione pigmentami fluorescencyjnymi.
(D) Filtr blokujący: Blokuje światło wzbudzające, które nie jest absorbowane przez próbkę i selektywnie przepuszcza fluorescencję. Niektóre długości fal fluorescencji są również transmitowane selektywnie. Mikroskop wykorzystujący światło ultrafioletowe jako źródło światła powodujące fluorescencję oświetlonego obiektu. Mikroskop elektronowy został po raz pierwszy zmontowany w 1931 roku w Berlinie w Niemczech przez Knorra i Hallowską. W mikroskopie tym zamiast wiązki światła wykorzystuje się wiązkę elektronów o dużej prędkości. Ponieważ długość fali przepływu elektronów jest znacznie krótsza niż długość fali światła, powiększenie mikroskopu elektronowego może osiągnąć 800,000 razy, a minimalna granica rozdzielczości wynosi 0,2 nanometra. Skaningowy mikroskop elektronowy, który zaczęto stosować w 1963 roku, pozwala ludziom zobaczyć maleńkie struktury na powierzchni przedmiotów.
3. Zakres zastosowania: służy do powiększania obrazów małych obiektów. Powszechnie stosowane w obserwacji biologii, medycyny, mikroskopijnych cząstek itp.
mikroskop konfokalny
1. Mikroskop konfokalny dodaje do ścieżki optycznej odbitego światła półodblaskową półsoczewkę, która załamuje odbite światło, które przeszło przez soczewkę w innych kierunkach. W ognisku znajduje się przegroda z otworkiem, a otworek jest umiejscowiony. W ognisku, za przegrodą, znajduje się fotopowielacz. Można sobie wyobrazić, że światło odbite przed i po skupieniu światła detekcyjnego przechodzi przez ten układ konfokalny i nie może zostać skupione na małym otworze i zostanie zablokowane przez przegrodę. Zatem fotometr mierzy intensywność światła odbitego w ognisku.
2. Zasada: Tradycyjne mikroskopy optyczne wykorzystują polowe źródła światła, a obraz każdego punktu próbki będzie zakłócany przez dyfrakcję lub rozproszone światło z sąsiednich punktów; laserowe skaningowe mikroskopy konfokalne wykorzystują wiązki laserowe do tworzenia punktowych źródeł światła poprzez oświetlające otworki w celu oświetlenia wnętrza próbki. Skanowany jest każdy punkt płaszczyzny ogniskowej, a oświetlony punkt próbki jest obrazowany w otworze detekcyjnym, który jest odbierany punkt po punkcie lub linia po linii przez fotopowielacz (PMT) lub urządzenie sprzęgające na zimno (ccCCD) za detektorem otworkowa i szybko na ekranie monitora komputera tworzy się fluorescencyjny obraz. Otwór oświetleniowy i otwór detekcyjny są sprzężone w stosunku do płaszczyzny ogniskowej obiektywu. Punkty na płaszczyźnie ogniskowej skupiają się jednocześnie na otworku oświetleniowym i otworku emisyjnym. Punkty poza płaszczyzną ogniskową nie zostaną zobrazowane w otworku detekcyjnym. Uzyskuje się w ten sposób obrazy konfokalne, czyli optyczne przekroje próbek, przezwyciężające wady rozmytych obrazów w zwykłych mikroskopach.
3. Obszary zastosowań: obejmujące medycynę, badania naukowe nad zwierzętami i roślinami, biochemię, bakteriologię, biologię komórki, embriologię tkanek, naukę o żywności, genetykę, farmakologię, fizjologię, optykę, patologię, botanikę, neuronaukę, biologię morską i materiałoznawstwo, nauki elektroniczne , mechanika, geologia naftowa, mineralogia.
