Jak wybrać pomiędzy mikroskopem odwróconym a mikroskopem fluorescencyjnym?
Mikroskop jest ważnym instrumentem w hodowli komórkowej i powiązanych eksperymentach z pochodnymi. Obecnie na rynku dostępnych jest wiele rodzajów mikroskopów, a wybór mikroskopu spełniającego potrzeby i odpowiedniego jest nie lada wyzwaniem. Poniżej przedstawimy zasady działania mikroskopów odwróconych i mikroskopów fluorescencyjnych, tak aby każdy mógł wybierać.
Mikroskop odwrócony, podobnie jak zwykły mikroskop, składa się głównie z trzech części: części mechanicznej, części oświetleniowej i części optycznej. Budowa mikroskopu odwróconego jest taka sama jak zwykłego mikroskopu pionowego, z tą różnicą, że soczewka obiektywu i system oświetlenia są odwrócone, przy czym pierwszy znajduje się pod sceną, a drugi nad sceną. Konstrukcja ta znacznie zwiększa efektywną odległość systemu reflektorów od sceny, ułatwiając umieszczenie grubszych narzędzi obserwacyjnych, takich jak szalki hodowlane i butelki do hodowli komórkowych (oczywiście można zastosować również szkiełka szklane), natomiast odległość robocza pomiędzy obiektyw, a materiał nie musi być bardzo duży. Mikroskop odwrócony jest używany przez instytucje medyczne i zdrowotne, uniwersytety i instytuty badawcze do obserwacji mikroorganizmów, komórek, bakterii, kultur tkankowych, zawiesin, osadów itp. Może w sposób ciągły obserwować proces proliferacji i podziału komórek i bakterii w pożywce hodowlanej oraz może uchwycić dowolną formę tego procesu. Szeroko stosowane w takich dziedzinach jak cytologia, parazytologia, onkologia, immunologia, inżynieria genetyczna, mikrobiologia przemysłowa i botanika.
Mikroskopia fluorescencyjna służy do badania absorpcji, transportu, dystrybucji i lokalizacji substancji w komórkach. Dla badanego obiektu istnieją dwa sposoby generowania fluorescencji: fluorescencja spontaniczna, która jest emitowana bezpośrednio przez promieniowanie ultrafioletowe; Fluorescencja wtórna ma miejsce, gdy obserwowany obiekt zostanie potraktowany barwnikami fluorescencyjnymi i wystawiony na działanie światła ultrafioletowego przed emisją fluorescencji. Niektóre substancje w komórkach, takie jak chlorofil, wytwarzają spontaniczną fluorescencję po wystawieniu na działanie promieniowania ultrafioletowego; Niektóre substancje same w sobie mogą nie emitować fluorescencji, ale zabarwione barwnikami fluorescencyjnymi lub przeciwciałami fluorescencyjnymi mogą również emitować wtórną fluorescencję w promieniowaniu ultrafioletowym. Mikroskop fluorescencyjny wykorzystuje punktowe źródło światła o wysokiej wydajności świetlnej do emitowania światła o określonej długości fali (UV 365 nm lub UV niebieski 420 nm) poprzez system filtrowania kolorów jako światło wzbudzające, które wzbudza substancje fluorescencyjne w próbce w celu emisji różnych kolorów fluorescencji. Następnie obserwuje się go przez powiększenie obiektywu i okularu. W ten sposób, nawet przy słabej fluorescencji, jest łatwo rozpoznawalny i bardzo czuły na silnie kontrastującym tle. Stosowany jest głównie do badania struktury, funkcji i składu chemicznego komórek.
Mikroskopię fluorescencyjną można podzielić na dwa typy: typ transmisyjny i typ opadający. Pierwsza jest bardziej prymitywna, druga bardziej zaawansowana. Podstawowa konstrukcja obu typów mikroskopów fluorescencyjnych jest podobna, z główną różnicą polegającą na tym, że transmitowane światło wzbudzające przechodzi przez próbkę, powodując całościową fluorescencję. Następnie fluorescencja dociera do soczewki obiektywu i im większe powiększenie, tym słabsza fluorescencja; Opadające światło wzbudzenia rzutuje na powierzchnię próbki, wytwarzając fluorescencję docierającą do soczewki obiektywu. Im większe powiększenie, tym silniejsza fluorescencja, dzięki czemu nadaje się do obserwacji z dużą mocą. Główne elementy mikroskopu fluorescencyjnego obejmują źródło światła lampy rtęciowej, płytkę filtra wzbudzenia, spektrofotometr (typ kroplowy), płytkę filtra tłumiącego i kondensator ciemnego pola (typ transmisyjny). Ponadto, ze względu na silne nagrzewanie się lamp rtęciowych, większość z nich jest również wyposażona w filtry pochłaniające ciepło. Niektóre mikroskopy fluorescencyjne mają również obiektyw z kontrastem fazowym i okrągłą aperturę, umożliwiającą obserwację z kontrastem fazowym. Niektóre mikroskopy fluorescencyjne przyjmują odwróconą strukturę, która jest również mikroskopem odwróconym i tak dalej.
Dodatkowo ww. mikroskopy można zestawiać w mikroskopy cyfrowe poprzez zainstalowanie przetwornika CCD, który przetwarza obrazy fizyczne widziane przez mikroskop na cyfrowe obrazy analogowe i obrazuje je na komputerze. Dzięki temu możemy przenieść nasze badania w dziedzinie mikro z tradycyjnej obserwacji obuocznej na reprodukcję za pomocą wyświetlaczy, poprawiając w ten sposób efektywność pracy.
