Metody obrazowania jasnego-pola i ciemnego-pola w mikroskopii fluorescencyjnej
(1) Metoda obrazowania jasnego pola (BFI), która pozwala jedynie transmitowanej wiązce elektronów w obszarze przyosiowym przejść przez otwór obiektywu, tworząc ciemny obraz na jasnym tle. Im mniejsza apertura obiektywu, tym większy kontrast obrazu w jasnym polu; (2) Obrazowanie w ciemnym polu (DFI) to technika, która umożliwia przejście tylko części wiązki rozproszonej pod dużym kątem lub określonej wiązki dyfrakcyjnej kryształu przez otwór obiektywu, blokując jednocześnie transmitowaną wiązkę. Tworzy to jasny obraz graficzny na ciemnym tle. Ta metoda obrazowania w ciemnym polu może poprawić kontrast obrazów i jest ważną techniką obrazowania.
Istnieją mniej więcej cztery metody uzyskiwania obrazów ciemnego pola przy użyciu mikroskopów fluorescencyjnych Leica: (1) utrzymywanie oświetlenia pionowego wzdłuż osi optycznej podczas przesuwania apertury obiektywu; (2) Zastosowanie oświetlenia ukośnego do wychwytywania rozproszonych wiązek w kierunku osi optycznej nazywa się obrazowaniem centralnego ciemnego pola (CDFI); (3) Otwór obiektywu z centralnym ogranicznikiem wiązki i okrągłą przezroczystą powierzchnią; (4) Użyj okrągłej przezroczystej soczewki kondensora do wykrywania światła i centralnej okrągłej przysłony dla soczewki obiektywu. Metoda * jest tutaj najprostsza, ale wykorzystuje obrazowanie elektroniczne w obszarze dystalnej tulei, więc aberracja jest duża, a jakość obrazu niezbyt dobra. Druga metoda pozwala uniknąć powyższych wad, ale apertura obiektywu mikroskopu fluorescencyjnego Leica przyjmuje tylko niewielką część rozproszonych, ugiętych elektronów, co skutkuje niższą wydajnością. Strona przysłony jest często poddawana bombardowaniu dużą ilością elektronów, co może łatwo spowodować asymetryczne zanieczyszczenie i wpłynąć na jakość obrazu. Obiektyw pierścieniowy został w tym aspekcie udoskonalony, lecz jego wadą jest to, że jest trudny w produkcji i trudno uzyskać pełną symetrię osiową. Biorąc pod uwagę stosunkowo łagodne wymagania dotyczące systemu oświetlenia, można zastosować to drugie rozwiązanie, które polega na dodaniu pierścieniowej apertury na skraplaczu w celu zapewnienia oświetlenia próbki za pomocą pustej wiązki światła. Efekt tego urządzenia. Rozdzielczość obrazu może być zbliżona do rozdzielczości obrazów w jasnym polu, a kontrast jest znacznie poprawiony.
