Wprowadzenie do wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej: zalety i wady
1. Wzbudzone światłem czerwonym lub podczerwonym, rozpraszanie światła jest małe, a rozpraszanie małych cząstek jest odwrotnie proporcjonalne do czwartej potęgi długości fali.
2. Można zebrać więcej rozproszonych fotonów z przekroju obrazowania bez konieczności stosowania otworków.
3. Otwory nie potrafią rozróżnić rozproszonych fotonów emitowanych z obszarów nieostrych lub ogniskowych, a multifotony mają lepszy stosunek sygnału do szumu w głębokim obrazowaniu.
4. Światło ultrafioletowe lub widzialne stosowane do wzbudzenia pojedynczych fotonów jest łatwo absorbowane i tłumione przez próbkę, zanim wiązka dotrze do płaszczyzny ogniskowej, co utrudnia wzbudzenie głębokich warstw.
5. W przypadku obserwacji pod mikroskopem biologicznym należy przede wszystkim zadbać o to, aby nie uszkodzić aktywnego stanu samego organizmu, utrzymać krążenie wody, stężenie jonów, tlenu i składników odżywczych. W zakresie obserwacji światła zarówno energia cieplna, jak i fotonowa musi mieścić się w dawce napromieniowania, a energia świetlna nie uszkadza komórek.
6. Mikroskopia wielofotonowa ma wiele zalet. Pod względem rozdzielczości trójwymiarowej, inwazji na głębokość, wydajności rozpraszania, światła tła, stosunku sygnału do szumu, kontroli itp. istnieją cechy, których poprzednie mikroskopy laserowe nie posiadają lub nie mogą przewyższyć
Wady wielofotonowego laserowego mikroskopu skaningowego:
1. Tylko do obrazowania fluorescencyjnego.
2. Jeżeli próbka zawiera chromofory, które mogą absorbować światło wzbudzające, próbka może ulec uszkodzeniu termicznemu.
3. Rozdzielczość jest nieznacznie zmniejszona, chociaż można ją poprawić, wykorzystując jednocześnie małe otwory konfokalne, występuje utrata sygnału.
4. Ze względu na ograniczenia drogich ultraszybkich laserów koszt wielofotonowych mikroskopów skaningowych jest stosunkowo wysoki.
