Wprowadzenie do zalet i wad wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej
1. Wzbudzając światło czerwone lub podczerwone, rozpraszanie światła jest małe, a rozpraszanie małych cząstek jest odwrotnie proporcjonalne do czwartej potęgi długości fali.
2. Z przekroju obrazowania można zebrać więcej rozproszonych fotonów bez konieczności stosowania otworków.
3. Otwór nie jest w stanie rozróżnić rozproszonych fotonów emitowanych z obszaru nieostrego lub obszaru ogniskowego, a stosunek sygnału do szumu w obrazowaniu wielofotonowym w głębokich warstwach jest dobry.
4. Światło ultrafioletowe lub widzialne stosowane do wzbudzenia pojedynczych fotonów jest łatwo absorbowane i tłumione przez próbkę, zanim wiązka dotrze do płaszczyzny ogniskowej, i trudno jest wzbudzić głębokie warstwy.
5. Podczas obserwacji pod mikroskopem biologicznym należy przede wszystkim zadbać o to, aby nie uszkodzić stanu aktywnego organizmu i utrzymać przepływ wody, stężenia jonów, tlenu i składników odżywczych. W przypadku obserwacji światłem zarówno energia cieplna, jak i fotonowa musi mieścić się w ilości naświetlania, a energia świetlna, aby komórki nie uległy uszkodzeniu.
6. Mikroskopia wielofotonowa ma wiele zalet. Takie jak rozdzielczość trójwymiarowa, penetracja głębokości, wydajność rozpraszania, światło tła, stosunek sygnału do szumu, kontrola itp. mają cechy, których nie miały poprzednie mikroskopy laserowe lub z którymi nie mogły się równać.
Wady wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej:
1. Może obrazować jedynie fluorescencję.
2. Jeżeli próbka zawiera chromofory pochłaniające światło wzbudzające, próbka może ulec uszkodzeniu termicznemu.
3. Rozdzielczość jest nieco zmniejszona. Chociaż można to poprawić, stosując jednocześnie otwory konfokalne, występuje utrata sygnału.
4. Koszt wielofotonowych mikroskopów skaningowych, ograniczony przez drogie, ultraszybkie lasery, jest stosunkowo wysoki.
