Miernik pH - Oznaczanie i regulacja pH medium
Na wszystkie mikroorganizmy ma wpływ pH środowiska, w którym żyją. Często obecność selektywnych gatunków zawęża zakres pH, w którym rosną. Czasami kwasowość lub zasadowość podłoża może również działać jako czynnik selekcji wzrostu. Jednak w przypadku biochemicznych pożywek testowych zakres pH, w którym mikroorganizmy wykazują aktywność tk w podłożu, jest węższy niż zakres pH wymagany do wzrostu, dlatego ważne jest dostosowanie pH pożywki do oczekiwanego zakresu. Gdy laboratorium przygotowuje pożywkę zgodnie ze składem pożywki, należy sprawdzić i wyregulować pH. Należy zaznaczyć, że nawet w przypadku gotowej syntetycznej pożywki odwodnionej dostarczonej przez producenta (zwłaszcza w przypadku niektórych odwodnionych pożywek zapasowych), końcowe pH należy zmierzyć po przygotowaniu pożywki doświadczalnej.
Najdokładniejszym sposobem pomiaru pH podłoża jest pehametr. Przed użyciem należy go skalibrować standardowym roztworem buforowym o znanym pH (zwykle pH wynosi od 4 do 7). Przepłucz elektrodę pehametru wodą destylowaną i zanurz ją w pożywce hodowlanej w zlewce, a następnie odczytaj pH pożywki ze skali pehametru. Każdy producent zapewnia szczegółowe instrukcje obsługi dla każdego typu pehametru.
Podczas przygotowywania pożywki hodowlanej PH można łatwo regulować za pomocą pehametru z mechanicznym mieszaniem. Pożywkę hodowlaną należy przygotować w pojemniku (takim jak duża zlewka), który można ciągle mieszać. lub magnesy owinięte teflonem. pH pożywki zawierającej agar należy wyregulować po rozmrożeniu, co można łatwo zrobić za pomocą podgrzewanego mieszadła magnetycznego. Podczas regulacji pH należy najpierw skalibrować pehametr za pomocą standardowego roztworu buforowego o znanym pH. Następnie umieść elektrodę kompozytową i termometr oporowy (jeśli występuje) w medium, powoli dodawaj odpowiednią ilość kwasu solnego i wodorotlenku sodu od końca zlewki oddalonego od elektrody, tak aby medium osiągnęło i utrzymało wymagane pH.
Kompensacja temperatury pehametru powinna uwzględniać wpływ temperatury na układ elektrod: w niektórych rozcieńczeniach i mediach pH zmienia się znacznie wraz z temperaturą. W przypadku płynnych mediów i rozcieńczeń, pH można zwykle regulować i mierzyć w temperaturze 25 stopni lub w temperaturze, w której są używane.
pH podłoża agarowego musi być wyregulowane po rozpuszczeniu, a temperatura rozpuszczania wynosi powyżej 45 stopni: dlatego pH podłoża stałego należy oznaczyć w temperaturze jego stosowania. W tym czasie należy użyć elektrody kompozytowej z płaską głowicą i ręcznie skalibrować kompensację temperatury pehametru. Jeśli podczas przygotowywania pożywki hodowlanej zostanie stwierdzone, że pH pożywki hodowlanej różni się między stanem topnienia a stanem zestalenia, oznacza to, że wystąpił błąd w dostosowaniu pH.
Podobnie, gdy przygotowana pożywka jest sterylizowana termicznie (np. autoklawowana), może również ulegać zmianom pH. W przypadku podłoża odwodnionego producent wziął to pod uwagę i zwykle nie ma potrzeby korygowania pH, ale należy dokładnie sprawdzić pH używanego podłoża. Jeśli pH odwodnionego podłoża agarowego musi być wyregulowane podczas ponownego rozpuszczania lub przygotowywania, najlepiej jest wyregulować je za pomocą wyjałowionego przez filtr kwasu solnego i roztworu wodorotlenku sodu po etapie sterylizacji, aby uniknąć przegrzania podłoża. Podczas przygotowywania pożywek z różnymi surowcami lub farmaceutykami, po autoklawowaniu należy sprawdzić pH pożywek. Ponadto, jeśli okaże się, że pH pożywki zmienia się tak samo po każdym autoklawie, pH można odpowiednio dostosować podczas przygotowywania pożywki. Jednak nadal konieczne jest określenie końcowego pH pożywki po sterylizacji.
