Wymagania dotyczące przygotowania szkiełek mikroskopu fluorescencyjnego
(1) Szkiełko szklane
Grubość szkiełka powinna wynosić od 0,8 do 1,2 mm. Jeśli szkiełko będzie zbyt grube, z jednej strony pochłonie więcej światła, z drugiej zaś nie pozwoli na skupienie się światła wzbudzenia na preparacie. Szkiełko szklane musi być gładkie, mieć jednakową grubość i nie wykazywać wyraźnej spontanicznej fluorescencji. Czasami potrzebne są szkiełka ze szkła kwarcowego.
(2) Szkiełko nakrywkowe
Grubość szkła nakrywkowego wynosi około 0,17 mm i jest gładka. W celu wzmocnienia światła wzbudzającego można zastosować także szkło interferencyjne. Jest to specjalnie zaprojektowane szkło nakrywkowe z kilkoma warstwami substancji (takich jak fluorek magnezu), które mają różny wpływ interferencji na światło o różnych długościach fal. Może pozwolić na płynny przebieg fluorescencji, podczas gdy światło wzbudzenia odbitego może wzbudzić próbkę.
(3) Próbka
Plastry tkanek lub inne próbki nie powinny być zbyt grube. Jeśli są zbyt grube, większość światła wzbudzenia jest pochłaniana w dolnej części próbki, natomiast górna część obserwowana bezpośrednio przez obiektyw nie jest w pełni wzbudzana. Ponadto nakładanie się komórek lub maskowanie zanieczyszczeń może mieć wpływ na ocenę.
(4) Środek uszczelniający
Jako środek mocujący powszechnie stosuje się glicerynę, która nie może wykazywać spontanicznej fluorescencji, jest bezbarwna i przezroczysta. Jasność fluorescencji jest stosunkowo jasna przy pH 8,5-9,5 i niełatwo ją szybko zanikać. Dlatego jako środek uszczelniający powszechnie stosuje się równą mieszaninę gliceryny i 0,5 mola/l buforu węglanowego o pH 9,0-9,5.
(5) Olej lustrzany
W przypadku stosowania mikroskopu fluorescencyjnego z ciemnym polem i mikroskopu olejowego do obserwacji próbek należy zastosować olej lustrzany. Można zastosować specjalny, niefluorescencyjny olej lustrzany lub jako zamiennik można zastosować glicerol. Można także zastosować ciekłą parafinę, jednak współczynnik załamania światła jest niski i ma niewielki wpływ na jakość obrazu.
