Umiejętności i metody posługiwania się mikroskopem fluorescencyjnym
Parametry techniczne mikroskopu fluorescencyjnego 1. Okular szerokokątny 2. Obiektyw achromatyczny 3. Czterootworowy konwerter obiektywu 4. Urządzenie emitujące fluorescencję niebieski (b) zielony (g) układ wzbudzenia 10lampa rtęciowa 0W 5. Współosiowy gruby mechanizm mikro-ogniskowania: zakres ogniskowania 15 mm, wartość mikrosiatki 0,002 mm 6. Zakres ruchu wzdłużnego dwuwarstwowego stołu mechanicznego: 70 mm, zakres ruchu bocznego: 50 mm.
Umiejętności i metody posługiwania się mikroskopem fluorescencyjnym
(1) szkiełka
Grubość szkiełka powinna wynosić od 0.8-1.2 mm do 1,2 mm. Zbyt grube szkiełko z jednej strony nie pochłonie zbyt dużo światła, z drugiej zaś nie spowoduje skupienia się światła wzbudzenia na preparacie. Szkiełko musi być gładkie, mieć jednakową grubość i być wolne od oczywistej spontanicznej fluorescencji. Czasami potrzebne są szkiełka Shi Ying.
(2) Szklana osłona
Szkło nakrywkowe ma grubość około 0,17 mm i jest gładkie. W celu wzmocnienia światła wzbudzenia można zastosować również interferencyjne szkło nakrywkowe, które jest rodzajem specjalnego szkła nakrywkowego z kilkoma warstwami substancji (np. fluorku magnezu), które przy różnych długościach fali światła wykazują różne efekty interferencyjne. Może sprawić, że fluorescencja przejdzie płynnie i odbije światło wzbudzenia, a to odbite światło wzbudzenia może wzbudzić próbkę.
(3) Okazy
Skrawki tkanek lub inne próbki nie powinny być zbyt grube. Jeżeli jest zbyt gruba, większość światła wzbudzającego jest pochłaniana w dolnej części próbki, natomiast górna część obserwowana bezpośrednio przez obiektyw nie jest w pełni wzbudzana. Ponadto nakładanie się komórek lub maskowanie zanieczyszczeń wpływa na ocenę.
(4) środek uszczelniający
Jako środek uszczelniający powszechnie stosuje się glicerol, który musi być bezbarwny i przezroczysty, bez spontanicznej fluorescencji. Jasność fluorescencji jest jasna przy pH 8,5 ~ 9,5 i nie jest łatwo szybko zanikać. Dlatego jako środek uszczelniający często stosuje się równoważną mieszaninę gliceryny i buforu węglanowego o stężeniu 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5.
(5) olej lustrzany
Ogólnie rzecz biorąc, podczas obserwacji próbek za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego z ciemnym polem i lustra olejowego należy stosować olej lustrzany. Najlepiej zastosować specjalny, niefluorescencyjny olej lustrzany, można też zastosować w zamian powyższą glicerynę. Można także zastosować parafinę ciekłą, jednak współczynnik załamania światła jest niski, co ma niewielki wpływ na jakość obrazu.
