Użytkowanie stereoskopowego mikroskopu fluorescencyjnego i środki ostrożności
Instrukcje:
(1) Umieść arkusz materiału na scenie.
(2) Włącz stabilizator napięcia mikroskopu fluorescencyjnego. Następnie naciśnij grupę startową, aby zapalić lampę UV i nie wyłączaj jej w ciągu 15 minut i nie uruchamiaj jej ponownie w ciągu 3 minut po jej wyłączeniu.
(3) Ustaw filtr wzbudzenia na v, filtr separacji kolorów na v i wybierz filtr blokujący 495 lub 475 nm.
(4) Wybierz fluorescencyjny mikroskop obiektywowy uvFL40, uvFL100 do badania mikroskopowego.
(5) Dodaj niefluorescencyjny olej na szkiełko, najpierw użyj 40x, a następnie użyj mikroskopu skupiającego 100x, aby sprawdzić. Pojawia się fluorescencja.
(7) Ponieważ fluorescencja substancji fluorescencyjnych stopniowo słabnie wraz z upływem czasu, gdy są one naświetlane światłem ultrafioletowym, podczas badania mikroskopowego należy często zmieniać pole widzenia.
(8) Mikroskopy uvFL10 lub uvFL20 o niskim powiększeniu mogą być również używane do kontroli materiałów (w przypadku soczewek o niskim powiększeniu nie dodaje się oleju fluorescencyjnego).
Metoda rejestracji obrazu fluorescencyjnego:
Obraz fluorescencyjny widziany przez mikroskop fluorescencyjny ma zarówno cechy morfologiczne, jak i kolor i jasność fluorescencji. Oceniając wyniki, należy je połączyć, aby uzyskać kompleksową ocenę. Wyniki rejestrowane są na podstawie wskaźników subiektywnych, czyli obserwacji wzrokowej pracowników. Jako ogólna obserwacja jakościowa, zasadniczo wiarygodna. Wraz z rozwojem technologii i nauki do rejestrowania wyników ocen w różnym stopniu stosuje się obiektywne wskaźniki, takie jak spektrofotometry komórkowe, analizatory obrazu i inne instrumenty. Jednak wyniki rejestrowane przez te instrumenty muszą być również połączone z subiektywnymi ocenami.
Fotografia z mikroskopu fluorescencyjnego jest bardzo potrzebna do rejestrowania obrazów fluorescencyjnych. Ponieważ fluorescencja jest łatwa do wyblaknięcia i osłabienia, konieczne jest rejestrowanie wyników w czasie rzeczywistym. Metoda jest zasadniczo taka sama, jak w przypadku zwykłej fotomikrografii. Wystarczy użyć filmu światłoczułego o dużej szybkości, takiego jak ASA200 lub wyższy lub 24. wyższy. Ponieważ światło ultrafioletowe ma silny wpływ na wygaszanie fluorescencji, takie jak markery FITC, jasność fluorescencji zmniejszy się o 50 procent po napromieniowaniu światłem ultrafioletowym przez 30 sekund. Dlatego też, jeśli szybkość naświetlania jest zbyt mała, nie można wykonać zdjęcia fluorescencyjnego. Mikroskopy fluorescencyjne do badań ogólnych posiadają półautomatyczny lub w pełni automatyczny system fotomikrografii.
Środki ostrożności:
(1) Działaj ściśle zgodnie z wymaganiami instrukcji fabrycznych mikroskopu fluorescencyjnego i nie zmieniaj dowolnie programu.
(2) Inspekcję należy przeprowadzić w ciemnym pomieszczeniu. Po wejściu do ciemni podłącz zasilanie i zapal ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową na 5-15 minuty. Po ustabilizowaniu się silnego światła ze źródła światła oczy całkowicie przystosowują się do ciemni, a następnie rozpoczynają obserwację preparatu.
(3) Aby zapobiec uszkodzeniu oczu przez promienie ultrafioletowe, podczas regulacji źródła światła należy nosić okulary ochronne.
(4) Zaleca się, aby czas inspekcji wynosił 1-2 godzin za każdym razem. Jeśli przekroczy 90 minut, intensywność światła ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej będzie stopniowo spadać, a fluorescencja będzie słabnąć; po naświetleniu preparatu promieniami ultrafioletowymi przez 3-5 min fluorescencja również ulegnie znacznemu osłabieniu; dlatego nie powinien przekraczać najwyżej 2-2 godzin. 3 godz.
(5) Żywotność źródła światła mikroskopu fluorescencyjnego jest ograniczona i próbki należy badać zbiorczo, aby zaoszczędzić czas i chronić źródło światła. Gdy jest gorąco, należy dodać wentylatory, aby rozproszyć ciepło, a nowe żarówki należy rejestrować od początku ich czasu użytkowania. Jeśli chcesz użyć jej ponownie po zgaszeniu lampy, przed jej zapaleniem musisz odczekać, aż żarówka wystarczająco ostygnie. Unikaj zapalania źródła światła kilka razy dziennie.
(6) Obserwować preparat bezpośrednio po barwieniu, ponieważ z czasem fluorescencja będzie stopniowo słabnąć. Jeśli próbka jest przechowywana w plastikowym worku polietylenowym w temperaturze 4 stopni, czas osłabienia fluorescencji może zostać opóźniony, a środek zamykający nie odparuje.
(7) Standard oceny jasności fluorescencji: jest ogólnie podzielony na cztery poziomy, to znaczy „jeden” - nie można zobaczyć żadnej lub słabej fluorescencji. „plus” — widać tylko wyraźnie widoczną fluorescencję. „ plus plus ”—Widoczny i jasny
