Budowa i główne elementy mikroskopu fluorescencyjnego
Mikroskopia fluorescencyjna jest podstawowym narzędziem w cytochemii immunofluorescencyjnej. Składa się z głównych elementów, takich jak źródło światła, system płyt filtracyjnych i układ optyczny. Polega na wykorzystaniu określonej długości fali światła do wzbudzenia próbki w celu wyemitowania fluorescencji oraz do obserwacji obrazu fluorescencyjnego próbki poprzez wzmocnienie układu soczewki obiektywu i okularu.
Budowa i główne elementy mikroskopu fluorescencyjnego
(1) Źródło światła
Obecnie jako źródła światła często stosuje się ultrawysokociśnieniowe lampy rtęciowe o mocy 200 W. Wykonane są ze szkła kwarcowego, w środku mają kulisty kształt, a wewnątrz wypełniona jest pewną ilością rtęci. Podczas pracy wyładowanie między dwiema elektrodami powoduje odparowanie rtęci, a ciśnienie powietrza w kuli gwałtownie wzrasta. Gdy rtęć całkowicie odparuje, może osiągnąć 50-70 standardowe ciśnienie atmosferyczne, a proces ten zwykle trwa około 5-15 minut. Luminescencja ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej jest wynikiem emisji kwantów światła podczas ciągłej dysocjacji i redukcji cząsteczek rtęci przez wyładowania między elektrodami. Emituje silne światło ultrafioletowe i niebiesko-fioletowe, które wystarcza do wzbudzenia różnych substancji fluorescencyjnych, dlatego jest szeroko stosowany w mikroskopii fluorescencyjnej.
Lampy rtęciowe o ultrawysokim ciśnieniu również emitują dużo ciepła. Dlatego latarnia musi mieć dobre warunki odprowadzania ciepła, a temperatura środowiska pracy nie powinna być zbyt wysoka.
Nową lampę rtęciową o ultrawysokim ciśnieniu można zapalić bez wysokiego napięcia na początku użytkowania. Po okresie użytkowania należy go uruchomić przy wysokim napięciu (około 15000V). Po uruchomieniu napięcie robocze konserwacji wynosi zwykle 50-60 V, a prąd roboczy wynosi około 4A. Średnia żywotność ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej o mocy 200 W wynosi około 200 godzin, jeśli jest używana za każdym razem przez 2 godziny. Im krótszy czas pracy, tym krótsza żywotność. Jeśli jest używany tylko przez 20 minut, żywotność zostanie zmniejszona o 50 procent. Dlatego należy zminimalizować liczbę uruchomień podczas korzystania z niego. Podczas użytkowania żarówki stopniowo zmniejsza się jej skuteczność świetlna. Po zgaśnięciu kontrolki poczekaj, aż ostygnie przed ponownym uruchomieniem. Nie wyłączaj żarówki natychmiast po jej zapaleniu, aby nie uszkodzić elektrody na skutek niepełnego odparowania rtęci. Zwykle musi czekać 15 minut. Ze względu na wysokie ciśnienie ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej i silne promienie ultrafioletowe, przed zapaleniem należy umieścić żarówkę w komorze lampy, aby nie uszkodzić oczu i nie spowodować działania w przypadku wybuchu .
Obwód ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej (100W lub 200W) ze źródłem światła i kilkoma częściami, w tym transformatorem, statecznikiem i rozrusznikiem. W komorze lampy znajduje się system regulacji środka świecenia żarówki. Pokryty aluminium wklęsły odbłyśnik jest zainstalowany za bańką żarówki, a soczewka zbierająca światło jest zainstalowana z przodu.
Domowa ultrawysokociśnieniowa lampa rtęciowa GCQ{1}} ma dobre parametry i może zastąpić importowane żarówki, takie jak HBO{2}}. Średnia żywotność to ponad 200h, a cena jest stosunkowo niska.
Proste i przenośne źródło światła bromowo-wolframowego o wysokiej temperaturze barwowej, opracowane w moim kraju, ma niewielkie rozmiary, jest lekkie, ma niski pobór mocy, podwójne zastosowanie prądu przemiennego i stałego (z zasilaczem prądu stałego), jest łatwe do przenoszenia, łatwe w użyciu i ma spopularyzowana i stosowana.
(2) System filtrów kolorów
System filtrów barwnych jest ważną częścią mikroskopu fluorescencyjnego, który składa się z płytki filtra wzbudzenia i płytki filtra dociskowego. Model płytki filtracyjnej i nazwa każdego producenta często nie są jednolite. Płytki filtracyjne są zwykle nazywane na podstawie podstawowego koloru, litery z przodu reprezentują kolor, litery z tyłu reprezentują szkło, a liczby reprezentują cechy modelu. mikroskop Olimpu
(3) Obiektyw
Można stosować różne soczewki obiektywowe, ale stosuje się soczewki achromatyczne, ponieważ ich autofluorescencja jest minimalna, a ich właściwości przepuszczania światła (zakres długości fali) są odpowiednie dla fluorescencji. Ponieważ jasność fluorescencji obrazu w polu widzenia mikroskopu jest proporcjonalna do kwadratu apertury soczewki obiektywu i odwrotnie proporcjonalna do jej powiększenia, w celu poprawy jasności obrazu fluorescencji, soczewka obiektywu o dużym należy zastosować współczynnik przysłony. Zwłaszcza przy dużym powiększeniu jego efekt jest bardzo oczywisty. Dlatego w przypadku preparatów o niewystarczającej fluorescencji należy stosować obiektyw o dużej aperturze z możliwie najniższym okularem (4×, 5×, 6,3× itd.).
(4) Lustro
Warstwa odblaskowa odbłyśnika jest na ogół pokryta aluminium, ponieważ aluminium pochłania mniej w niebiesko-fioletowym obszarze światła ultrafioletowego i światła widzialnego, a odbicie wynosi ponad 90 procent, podczas gdy odbicie srebra wynosi tylko 70 procent. Zwykle stosuje się płaski odbłyśnik.
(5) Skraplacz
Kondensatory przeznaczone do mikroskopii fluorescencyjnej wykonane są ze szkła kwarcowego lub innego szkła przepuszczającego promieniowanie UV. Istnieją dwa rodzaje kondensatorów jasnego pola i kondensatorów ciemnego pola. Istnieją również koncentratory fluorescencji z kontrastem fazowym.
(6) Urządzenie epilight
Nowy typ urządzenia epi-light polega na tym, że po tym, jak światło ze źródła światła uderza w filtr spektroskopii interferencyjnej, część o krótkiej długości fali (ultrafiolet i fioletowo-niebieski) jest odbijana ze względu na właściwości powłoki na filtrze. Kiedy filtr jest skierowany w stronę źródła światła, kąt wynosi 45. Kiedy jest przechylony, strzela pionowo do soczewki obiektywu i przez soczewkę do preparatu, tak że preparat jest wzbudzony. W tym czasie soczewka obiektywu działa bezpośrednio jako kolektor światła. Jednocześnie długa część filtra (zielona, żółta, czerwona itp.) jest przezroczysta dla filtra, dzięki czemu nie odbija się w kierunku soczewki obiektywu, a filtr działa jak płytka filtra wzbudzenia, ponieważ fluorescencja próbki znajduje się w obszarze długich fal światła widzialnego, może przejść przez filtr i dotrzeć do okularu w celu obserwacji, jasność obrazu fluorescencyjnego wzrasta wraz ze wzrostem powiększenia i jest silniejsza niż światło przechodzące źródło przy dużym powiększeniu. Oprócz funkcji transmisyjnego źródła światła, jest bardziej odpowiedni do bezpośredniej obserwacji nieprzezroczystych i półprzezroczystych próbek, takich jak grube warstwy, membrany filtracyjne, kolonie i próbki kultur tkankowych. Nowe mikroskopy fluorescencyjne opracowane w ostatnich latach wykorzystują głównie urządzenia epi-light, które nazywane są mikroskopami epi-fluorescencyjnymi.
