Zasada działania i charakterystyka strukturalna mikroskopu fluorescencyjnego
Mikroskopia fluorescencyjna wykorzystuje punkt o wysokiej wydajności świetlnej do emitowania światła o określonej długości fali (takiego jak światło ultrafioletowe 3650 cali lub fioletowo-niebieskie światło 4200 cali) przez system filtrów jako światło wzbudzające do wzbudzania substancji fluorescencyjnych w próbce w celu emitowania fluorescencji różne kolory Następnie obserwuj przez powiększenie obiektywu i okularu. W ten sposób, na silnie kontrastowym tle, nawet jeśli fluorescencja jest bardzo słaba, jest łatwa do zidentyfikowania i ma wysoką czułość. Stosowany jest głównie do badań struktury i funkcji komórek oraz składu chemicznego. Podstawowa struktura mikroskopu fluorescencyjnego składa się ze zwykłego mikroskopu optycznego oraz niektórych akcesoriów (takich jak źródło światła fluorescencyjnego, filtr wzbudzający, rozdzielacz wiązki dwukolorowej i filtr blokujący itp.). Fluorescencyjne źródło światła — zwykle stosuje się ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową (50-200 W), która może emitować światło o różnych długościach fal, ale każda substancja fluorescencyjna ma długość fali wzbudzenia, która wytwarza najsilniejszą fluorescencję, dlatego filtr wzbudzenia ( Ogólnie rzecz biorąc, istnieją ultrafioletowe, fioletowe, niebieskie i zielone filtry wzbudzające), które przepuszczają tylko światło wzbudzające o określonej długości fali i napromieniowują preparat, pochłaniając inne światło. Po napromieniowaniu światłem wzbudzenia każda substancja emituje widzialną fluorescencję o długości fali dłuższej niż długość fali napromieniowania w bardzo krótkim czasie. Fluorescencja jest specyficzna i generalnie słabsza niż światło wzbudzające. Aby zaobserwować specyficzną fluorescencję, za soczewką obiektywu należy dodać blokowanie (lub tłumienie) i stosować w połączeniu z nim.
Różnica między mikroskopem fluorescencyjnym a zwykłym mikroskopem
1. Metoda oświetlenia jest zwykle episkopowa, to znaczy źródło światła jest rzutowane na próbkę przez soczewkę obiektywu;
2. Źródłem światła jest światło ultrafioletowe, długość fali jest krótsza, a rozdzielczość jest wyższa niż w przypadku zwykłych mikroskopów;
3. Istnieją dwa specjalne filtry, jeden przed źródłem światła służy do filtrowania światła widzialnego, a ten między okularem a soczewką obiektywu służy do filtrowania promieni ultrafioletowych w celu ochrony ludzkiego oka.
Mikroskop fluorescencyjny jest również rodzajem mikroskopu optycznego, główna różnica polega na tym, że długość fali wzbudzenia obu jest inna. Określa to różnicę między mikroskopem fluorescencyjnym a zwykłym mikroskopem optycznym pod względem budowy i zastosowania.
Mikroskopia fluorescencyjna jest podstawowym narzędziem w cytochemii immunofluorescencyjnej. Składa się z głównych elementów, takich jak źródło światła, system płyt filtracyjnych i układ optyczny. Polega na wykorzystaniu określonej długości fali światła do wzbudzenia próbki w celu wyemitowania fluorescencji oraz do obserwacji obrazu fluorescencyjnego próbki poprzez wzmocnienie układu soczewki obiektywu i okularu.
