Specjalna konstrukcja mikroskopu fluorescencyjnego obejmuje:
(I) System filtrów barwnych
Filtr barwny jest ważną częścią mikroskopu fluorescencyjnego, jego podstawowymi elementami są filtr światła wzbudzenia (pierwszy filtr barierowy), filtr emisji światła (drugi filtr barierowy) oraz kompozycja półprzezroczysta i półantyfiltrowa (lustro rozszczepiające wiązkę). . Różni producenci modeli filtrów kolorów, nazwa często nie jest jednolita.
1. Filtr światła wzbudzenia i filtr światła emisji: w zależności od źródła światła i charakterystyki fluorochromu, zwykle wybiera się następujące trzy rodzaje dopasowania, aby zapewnić określony zakres długości fal światła wzbudzającego i wzbudzić fluorescencję próbki okular do obrazu.
Wzbudzenie UV: Filtr światła wzbudzenia umożliwia transmisję światła UV i blokuje przejście światła widzialnego powyżej 400 nm. Odpowiedni filtr emisji umożliwia przejście światła niebieskiego, które w polu widzenia wydaje się niebieskie, np. w przypadku barwienia DAPI.
Wzbudzenie światła niebieskiego: Filtr światła wzbudzenia umożliwia przejście niebieskiego światła, blokując inne długości fal światła. Odpowiedni filtr emisji umożliwia przejście zielonego światła, np. dla markerów barwiących GFP.
Wzbudzenie zielone: Filtr wzbudzenia umożliwia przejście zielonego światła, blokując inne długości fal. Odpowiedni filtr emisji zwykle przepuszcza światło czerwone, np. barwienie rodaminą.
2. Filtr półprzezroczysty i półodblaskowy: jego zadaniem jest całkowite zablokowanie wzbudzenia światła poprzez odbicie; oraz przez odpowiedni zakres długości fal emitowanego światła. Odpowiada mu model i wzbudzenie filtrów świetlnych oraz emisja filtrów świetlnych.
(B) obiektyw i okular
Można zastosować różne soczewki obiektywowe, ale * dobry wybór symetrycznej, achromatycznej soczewki obiektywowej, ze względu na jej autofluorescencję jest bardzo mała i właściwości przepuszczania światła (zakres długości fali) odpowiednie dla fluorescencji. Ponieważ jasność fluorescencji obrazu w polu widzenia mikroskopu jest proporcjonalna do kwadratu szybkości wylotowej obiektywu i odwrotnie proporcjonalna do jego powiększenia, zatem aby poprawić jasność obrazu fluorescencyjnego, należy obiektyw o dużej szybkości wylotowej być użytym. Szczególnie w przypadku próbek, których fluorescencja nie jest wystarczająco silna, należy używać dużej szybkości przepływu światła, obiektywu o wysokiej transmisji światła i możliwie najniższej wartości okularu.
(C) inne urządzenia optyczne
Odbłyśnik, jego warstwa odblaskowa jest zwykle pokryta aluminium, ponieważ aluminium w zakresie ultrafioletu i światła widzialnego pochłania mniej obszaru niebiesko-fioletowego, odbijając do 90% lub więcej (podczas gdy współczynnik odbicia srebra wynosi tylko 70%). Powszechnie stosuje się odbłyśniki płaskie. Lustro punktowe, zaprojektowane i wyprodukowane specjalnie do mikroskopii fluorescencyjnej Lustro punktowe wykonane ze szkła kwarcowego lub innego szkła przepuszczającego promienie UV. Urządzenie ze światłem padającym, które oprócz funkcji źródła światła przechodzącego, bardziej nadaje się do nieprzezroczystych i półprzezroczystych próbek, takich jak gruba folia, membrana filtracyjna, kolonia, hodowle tkankowe i inne próbki do bezpośredniej obserwacji. W ostatnich latach nastąpił rozwój nowego typu mikroskopu fluorescencyjnego wykorzystującego urządzenie ze światłem padającym, zwanego mikroskopem fluorescencyjnym ze opadającym światłem.
(D) źródło światła
Obecnie jako źródło światła stosuje się wysokoprężną lampę rtęciową o mocy 50 lub 100 W. Działając przez wyładowanie dwóch elektrod, spowodowane parowaniem rtęci, kula ciśnienia powietrza szybko wzrasta (proces ten trwa zwykle około 5 ~ 15 minut), a w procesie emisji kwantów światła długość fali uwolnionego światła jest wystarczająca do wzbudzenia wszelkiego rodzaju substancje fluorescencyjne, dlatego powszechnie stosuje się mikroskopię fluorescencyjną.
Lampy rtęciowe mają stosunkowo krótką żywotność, zwykle 200 godzin, i w odpowiedzi na to ograniczenie żywotności, w ostatnich latach szeroko zastosowano nowe źródło światła fluorescencyjnego, X-Cite, ze względu na długą żywotność lampy wynoszącą 2000 godzin i elastyczność użytkowania - nie wymaga wstępnego podgrzewania i jest gotowy do użycia od razu po wyjęciu z pudełka.
