Istnieją dwa typy mikroskopów fluorescencyjnych w zależności od ich ścieżki światła:
1. Transmisyjny mikroskop fluorescencyjny: Wzbudzające źródło światła służy do wzbudzania fluorescencji poprzez przejście przez materiał próbki przez soczewkę kondensora. Można również zastosować powszechnie używane koncentratory ciemnego pola, a zwykłe koncentratory można zastosować do regulacji reflektora w celu przekierowania i skierowania światła wzbudzającego na próbkę. Jest to stosunkowo staromodny mikroskop fluorescencyjny. Jego zaletą jest silna fluorescencja przy małym powiększeniu, wadą zaś jest to, że jej fluorescencja maleje wraz ze wzrostem powiększenia. Dlatego lepiej jest obserwować większe próbki materiałów.
2. Mikroskop fluorescencyjny ze spadającym światłem to nowy typ mikroskopu fluorescencyjnego opracowany w czasach współczesnych. W przeciwieństwie do powyższego, światło wzbudzające pada z soczewki obiektywu w dół na powierzchnię próbki, wykorzystując tę samą soczewkę obiektywu, co kondensator oświetlenia i soczewka obiektywu do zbierania fluorescencji. Do ścieżki optycznej oddalonej o 45 stopni od lekkiego uranu należy dodać dwukolorowy rozdzielacz wiązki. Kąt, światło wzbudzenia odbija się od soczewki obiektywu i skupia na próbce. Fluorescencja generowana przez próbkę, a także światło wzbudzenia odbite od powierzchni soczewki obiektywu i szkła nakrywkowego, przedostają się do soczewki obiektywu i powracają do dwukolorowego rozdzielacza wiązki, oddzielając światło wzbudzenia i fluorescencję. Resztkowe światło wzbudzenia jest następnie pochłaniane przez filtr blokujący. Jeśli stosowane są różne kombinacje filtrów wzbudzających/dwukolorowych separatorów wiązek/filtrów blokujących, mogą one zaspokoić potrzeby różnych produktów reakcji fluorescencyjnej. Zaletami tego mikroskopu fluorescencyjnego są równomierne oświetlenie pola, wyraźne obrazowanie i silniejsza fluorescencja przy większym powiększeniu.
Instrukcja obsługi mikroskopu fluorescencyjnego
1. Włącz źródło światła. Ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową należy podgrzać przez kilka minut, aby osiągnęła maksymalną jasność.
2. Transmisyjna mikroskopia fluorescencyjna wymaga zainstalowania wymaganego filtra wzbudzenia pomiędzy źródłem lampy a kondensatorem oraz odpowiedniego filtra blokującego za soczewką obiektywu. Mikroskop fluorescencyjny padającego światła musi włożyć wymagany filtr wzbudzenia/dwukolorowy rozdzielacz wiązki/blok filtra blokującego w szczelinę ścieżki optycznej.
3. Obserwuj mikroskopem małej mocy i wyreguluj środek źródła światła zgodnie z przyrządem regulacyjnym różnych typów mikroskopów fluorescencyjnych, tak aby znajdowało się ono w środku całego punktu oświetlanego.
4. Umieścić próbkę i wyostrzyć ją w celu obserwacji. Podczas użytkowania należy zachować ostrożność: Nie obserwować bezpośrednio na oczy przed zamontowaniem filtra, aby uniknąć uszkodzenia oczu; Podczas obserwacji próbek za pomocą mikroskopu olejowego należy używać specjalnego, niefluorescencyjnego mikroskopu olejowego; Po wyłączeniu wysokociśnieniowej lampy rtęciowej nie można jej natychmiast włączyć ponownie. Ponowne uruchomienie zajmuje 5 minut, w przeciwnym razie będzie niestabilne i wpłynie na żywotność lampy rtęciowej.
(3) Obserwując pod mikroskopem fluorescencyjnym na platformie dydaktycznej z filtrem światła niebiesko-fioletowego, można zobaczyć komórki wybarwione barwnikiem fluorescencyjnym 0.01% oranżu akrydynowego. Jądro i cytoplazma są wzbudzone, tworząc dwa różne kolory fluorescencji (ciemnozielony i pomarańczowo-czerwony).
