Dlaczego musimy używać mikroskopu konfokalnego?
1. Po wysiłkach i ulepszeniach naszych wielkich poprzedników, mikroskop optyczny osiągnął doskonały poziom. Tak naprawdę zwykłe mikroskopy mogą w prosty i szybki sposób dostarczyć nam pięknych obrazów mikroskopowych. Jednakże nastąpiło wydarzenie, które wniosło rewolucyjną innowację do tego niemal doskonałego świata mikroskopów, a było wynalezieniem „laserowego skaningowego mikroskopu konfokalnego”. Cechą charakterystyczną tego nowego typu mikroskopu jest zastosowanie układu optycznego, który wyodrębnia informacje o obrazie jedynie z powierzchni, na której skupia się ostrość. Zmieniając ostrość i przywracając uzyskane informacje w pamięci obrazu, może uzyskać żywe obrazy z pełną inteligencją informacji 3D. Dzięki tej metodzie można łatwo uzyskać informacje o kształcie powierzchni, których nie można potwierdzić za pomocą konwencjonalnych mikroskopów. Dodatkowo dla typowych mikroskopów optycznych „zwiększanie rozdzielczości” i „pogłębianie się głębi ogniskowej” to warunki sprzeczne, zwłaszcza przy dużych powiększeniach. Jednak w mikroskopach konfokalnych problem ten można łatwo rozwiązać.
2. Zalety konfokalnych układów optycznych
Do punktowego oświetlenia próbki wykorzystuje się konfokalny układ optyczny, a odbite światło odbierane jest również przez czujnik punktowy. Po umieszczeniu próbki w pozycji ogniskowej prawie całe odbite światło może dotrzeć do czujnika. Gdy próbka odbiega od punktu ogniskowego, odbite światło nie może dotrzeć do czujnika. Oznacza to, że w konfokalnym układzie optycznym wysyłany będzie tylko obraz zgodny z ogniskiem, a światło punktowe i niepotrzebne rozproszone będzie ekranowane.
Dlaczego warto używać lasera?
W konfokalnych układach optycznych na próbkę przykładane jest oświetlenie punktowe, a światło odbite jest również odbierane przez czujnik punktowy. Dlatego punktowe źródła światła stały się konieczne. Laser jest bardzo punktowym źródłem światła. W większości przypadków źródłem światła w mikroskopii konfokalnej jest laser. Ponadto monochromatyczność, kierunkowość i doskonały kształt wiązki laserów są również ważnymi powodami ich powszechnego stosowania.
4. Możliwa staje się obserwacja w czasie rzeczywistym w oparciu o szybkie skanowanie
Skanowanie laserowe wykorzystuje reflektor akustyczny (AO) w kierunku poziomym i lustro Servo Galvano w kierunku pionowym. Ze względu na brak wibracji mechanicznych w optycznym zespole polaryzacji audio, możliwe jest szybkie skanowanie i obserwacja w czasie rzeczywistym na ekranie monitorującym. Bardzo ważnym czynnikiem wpływającym bezpośrednio na szybkość ustawiania ostrości i wyszukiwania pozycji jest duża prędkość tego typu kamer.
