Mikroskopy fluorescencyjne można podzielić na dwa typy zgodnie z zasadą ścieżki optycznej:
1. Mikroskop fluorescencyjny transmisyjny
Starsze mikroskopy fluorescencyjne wykorzystują światło reflektorów, aby wzbudzić fluorescencję, przekazując źródło światła wzbudzenia przez materiał próbki. Jego zaletą jest silna fluorescencja przy niskim powiększeniu, ale jej wadą jest to, że jej fluorescencja maleje wraz ze wzrostem powiększenia. Dlatego nadaje się tylko do obserwacji większych materiałów próbek.
2. Falling Light Fluorescence Microspope
Światło wzbudzenia spada z obiektywu obiektywnego na powierzchnię próbki, przy użyciu tego samego obiektywu obiektywnego co skraplacz oświetlenia i obiektyw obiektywu do zbierania fluorescencji.
Do ścieżki optycznej, która tworzy kąt 45 stopni z osi optycznej. Światło wzbudzenia jest odbijane w obiektywie obiektywnym i skupione na próbce. Fluorescencja generowana przez próbkę, a także światło wzbudzenia odbijane od powierzchni obiektywu obiektywnego i szkła osłony, wchodzą jednocześnie do obiektywu obiektywnego i powróć do rozdzielacza wiązki podwójnej kolorów, aby oddzielić światło wzbudzenia i fluorescencję. Resztkowe światło wzbudzenia jest następnie blokowane przez absorpcję filtra. Jeśli zastosowane są różne kombinacje filtrów wzbudzenia, podwójne separatory wiązki kolorów i filtry blokujące, mogą one zaspokoić potrzeby różnych produktów reakcji fluorescencyjnej.
Zaletą tego mikroskopu fluorescencyjnego są jednolite oświetlenie pola, wyraźne obrazowanie i silniejsza fluorescencja z większym powiększeniem.
3. Mikroskop kontrastowy fazowy
Mikroskop kontrastowy fazowy jest mikroskopem, który może przekonwertować różnicę fazową (lub różnicę ścieżki optycznej) wygenerowaną, gdy światło przechodzi przez obiekt na zmiany amplitudy (intensywność światła). Głównie stosowane do obserwacji żywych komórek, nieokreślonych skrawków tkanek lub zabarwionych próbek pozbawionych kontrastu.
Ludzkie oko może jedynie rozróżnić zmiany długości fali (kolor) i amplitudy światła widzialnego, ale nie może rozróżnić zmian fazy. Większość próbek biologicznych jest wysoce przezroczysta, a amplituda fal świetlnych pozostaje zasadniczo niezmieniona po przejściu, z jedynymi zmianami fazowymi.
Mikroskop kontrastowy fazowy w zasadzie przekształca różnicę ścieżki optycznej światła widzialnego przechodzącego przez próbkę w różnicę amplitudy, poprawiając w ten sposób kontrast między różnymi strukturami i powodując je jasne i widoczne. Po przejściu przez próbkę światło ulega załamaniu, odbiegając od pierwotnej ścieżki optycznej i opóźnianie o 1/4 λ (długość fali). Jeśli różnica ścieżki optycznej zostanie zwiększona lub zmniejszona o kolejne 1/4 λ, różnica ścieżki optycznej staje się 1/2 λ, a zakłócenia między dwiema wiązkami światła wzrasta lub zmniejsza się po połączeniu osi, poprawiając kontrast.
