Jakie są zalety konfokalnej mikroskopii laserowej
W porównaniu z tradycyjnymi mikroskopami szerokokątnymi, skaningowa mikroskopia konfokalna laserowa charakteryzuje się wysoką rozdzielczością, wysoką rozdzielczością i wysoką czułością. Jest szeroko stosowany w dziedzinie biomedycyny i stał się ważnym narzędziem obrazowania w tej dziedzinie. Dlaczego konfokal może się tak bardzo podobać i jakie ma zalety? W tym artykule wymieniono trzy aspekty do omówienia zalet konfokalnych.
Zbieraj sygnał tylko na płaszczyźnie ogniskowej, dzięki czemu obraz nie będzie rozmyty
W jaki sposób mikroskopia konfokalna osiąga tę przewagę? Wynika to z kluczowego sprzętu konfokalnego — otworka, jak pokazano na rysunku 2. Jest to mały otwór przed detektorem i umieszczony na płaszczyźnie optycznej sprzężonej z płaszczyzną ogniskową próbki. Kiedy światło wzbudzenia naświetla próbkę, zarówno płaszczyzna ogniskowa, jak i płaszczyzna nieogniskowa obszaru próbki zostaną wzbudzone w celu wygenerowania sygnałów fluorescencyjnych, dostosuj odpowiedni rozmiar otworu (zwykle 1 Au), tak aby sygnał fluorescencyjny na płaszczyźnie ogniskowej (zielona przerywana linia) mogą być sygnałami fluorescencyjnymi (czerwone i niebieskie przerywane linie), które przechodzą przez otworek, aby dotrzeć do detektora poza płaszczyzną ogniskowania, nie mogą dotrzeć do detektora przez otworek. Dzięki dodaniu otworków sprzętowych konfokal może uzyskiwać wyraźne i wysokiej jakości obrazy bez zmiany metody wykonywania zwykłych mikroskopów fluorescencyjnych.
Ze względu na istnienie otworka możemy akwizyować jedynie sygnał na płaszczyźnie ogniskowej i uzyskać dwuwymiarowy obraz o wysokiej rozdzielczości. Poprzez ciągłą regulację położenia osi Z można uzyskać dwuwymiarowe obrazy w różnych położeniach osi Z oraz można uzyskać serię ciągłych obrazów „plastrów optycznych”. Po uzyskaniu tych przekrojów optycznych moduł 3D wyposażony w oprogramowanie instrumentu może zostać użyty do rekonstrukcji obrazu 3D w celu uzyskania wyraźnego obrazu 3D. To nieniszczące, ciągłe gromadzenie obrazów optycznych warstw realizuje funkcję „komórkowego tomografii komputerowej”.
Dokładność wyników kolokalizacji jest ściśle związana z rozdzielczością obrazu, dlatego podczas przeprowadzania eksperymentów z kolokalizacją musimy wybrać metodę obrazowania o wyższej rozdzielczości. W porównaniu z tradycyjnymi mikroskopami, mikroskopia konfokalna stała się potężnym narzędziem do badań kolokalizacji ze względu na zalety wysokiej rozdzielczości.
Ze względu na istnienie granicy dyfrakcji, konwencjonalna konfokalna rozdzielczość optyczna wynosi około 200 nm. Kiedy potrzebujemy obserwować struktury większe niż 200nm, konfokal może dokładnie określić stopień kolokalizacji. Jeśli wymagana jest analiza kolokalizacji, można wybrać moduł analizy kolokalizacji wyposażony w oprogramowanie konfokalne.
