Parametry techniczne mikroskopii fluorescencyjnej Techniki i metody mikroskopii fluorescencyjnej
Parametry techniczne mikroskopu fluorescencyjnego 1. Okular szerokokątny 2. Obiektyw achromatyczny 3. Konwerter soczewek z czterema otworami 4. Urządzenie epifluorescencyjne System wzbudzenia niebieskiego (B) zielonego (G) 100W lampa rtęciowa 5. Współosiowy mechanizm regulacji ostrości zgrubnej i precyzyjnej: regulacja Zakres ostrości: 15mm Wartość siatki mikroruchów: 0.002mm 6. Dwuwarstwowy stół mechaniczny Zakres ruchu wzdłużnego: 70mm Zakres ruchu bocznego: 50mm
Parametry techniczne mikroskopu fluorescencyjnego
1. Okular szerokokątny
2. Achromatyczny obiektyw
3. Nosek z czterema otworami
4. Urządzenie epifluorescencyjne niebieski (B) zielony (G) układ wzbudzenia Lampa rtęciowa 100 W
5. Współosiowy mechanizm regulacji ostrości zgrubnej i precyzyjnej: zakres ostrości 15mm wartość siatki drobnego ruchu 0.002mm
6. Dwuwarstwowy mechaniczny stół warsztatowy
Zakres ruchu pionowego: 70 mm Zakres ruchu bocznego: 50 mm
Umiejętności i metody mikroskopii fluorescencyjnej
(1) Zjeżdżalnia szklana
Grubość szkiełka powinna wynosić od 0,8 do 1,2 mm. Zbyt gruby preparat z jednej strony pochłonie więcej światła, az drugiej strony światło wzbudzenia nie może być skoncentrowane na preparacie. Szkiełka muszą być gładkie, jednolitej grubości i wolne od oczywistej autofluorescencji. Czasami stosuje się szkiełka kwarcowe.
(2) Szkło nakrywkowe
Grubość szkiełka nakrywkowego wynosi około 0,17 mm, gładkie. W celu wzmocnienia światła wzbudzającego można również zastosować interferencyjne szkło nakrywkowe, czyli specjalne szkło nakrywkowe pokryte kilkoma warstwami substancji (np. fluorescencja idzie gładko. Wzbudzające światło jest przepuszczane i odbijane, a odbite światło wzbudzające pobudza preparat.
(3) Próbka
Plasterki tkanki lub inne próbki nie powinny być zbyt grube. Jeśli jest zbyt gruba, większość światła wzbudzenia zostanie pochłonięta w dolnej części preparatu, podczas gdy górna część obserwowana bezpośrednio przez obiektyw nie zostanie w pełni wzbudzona. Ponadto nakładanie się komórek lub pokrycie zanieczyszczeń wpływają na ocenę.
(4) Środek mocujący
Gliceryna jest powszechnie stosowana jako środek montażowy, który nie może mieć autofluorescencji, jest bezbarwny i przezroczysty, a jasność fluorescencji jest jaśniejsza przy pH 8.{1}},5 i nie jest łatwa do szybkiego wyblaknięcia. Dlatego jako środek utrwalający powszechnie stosuje się równą mieszaninę glicerolu i 0,5 mol/l roztworu buforu węglanowego o pH od 9,{6}} do 9,5.
(5) olej lustrzany
Ogólnie rzecz biorąc, podczas obserwacji preparatów za pomocą mikroskopów fluorescencyjnych ciemnego pola i soczewek immersyjnych z olejkiem należy stosować olejek immersyjny. Najlepiej używać specjalnego niefluorescencyjnego olejku immersyjnego. Zamiast tego można również zastosować powyższą glicerynę, a także płynną parafinę, ale współczynnik załamania światła jest niski, co ma niewielki wpływ na jakość obrazu. Wpływ.
Zasada działania i charakterystyka strukturalna mikroskopu fluorescencyjnego
Mikroskopia fluorescencyjna wykorzystuje punkt o wysokiej wydajności świetlnej do emitowania światła o określonej długości fali (takiego jak światło ultrafioletowe 3650 cali lub fioletowo-niebieskie światło 4200 cali) przez system filtrów jako światło wzbudzające do wzbudzania substancji fluorescencyjnych w próbce w celu emitowania fluorescencji różne kolory Następnie obserwuj przez powiększenie obiektywu i okularu. W ten sposób, na silnie kontrastowym tle, nawet jeśli fluorescencja jest bardzo słaba, jest łatwa do zidentyfikowania i ma wysoką czułość. Stosowany jest głównie do badań struktury i funkcji komórek oraz składu chemicznego. Podstawowa struktura mikroskopu fluorescencyjnego składa się ze zwykłego mikroskopu optycznego oraz niektórych akcesoriów (takich jak źródło światła fluorescencyjnego, filtr wzbudzający, rozdzielacz wiązki dwukolorowej i filtr blokujący itp.). Fluorescencyjne źródło światła — zwykle stosuje się ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową (50-200 W), która może emitować światło o różnych długościach fal, ale każda substancja fluorescencyjna ma długość fali wzbudzenia, która wytwarza najsilniejszą fluorescencję, dlatego filtr wzbudzenia ( Ogólnie rzecz biorąc, istnieją ultrafioletowe, fioletowe, niebieskie i zielone filtry wzbudzające), które przepuszczają tylko światło wzbudzające o określonej długości fali i napromieniowują preparat, pochłaniając inne światło. Po napromieniowaniu światłem wzbudzenia każda substancja emituje widzialną fluorescencję o długości fali dłuższej niż długość fali napromieniowania w bardzo krótkim czasie. Fluorescencja jest specyficzna i generalnie słabsza niż światło wzbudzające. Aby zaobserwować specyficzną fluorescencję, za soczewką obiektywu należy dodać blokowanie (lub tłumienie) i stosować w połączeniu z nim.
Różnica między mikroskopem fluorescencyjnym a zwykłym mikroskopem
1. Metoda oświetlenia jest zwykle episkopowa, to znaczy źródło światła jest rzutowane na próbkę przez soczewkę obiektywu;
2. Źródłem światła jest światło ultrafioletowe, długość fali jest krótsza, a rozdzielczość jest wyższa niż w przypadku zwykłych mikroskopów;
3. Istnieją dwa specjalne filtry, jeden przed źródłem światła służy do filtrowania światła widzialnego, a ten między okularem a soczewką obiektywu służy do filtrowania promieni ultrafioletowych w celu ochrony ludzkiego oka.
Mikroskop fluorescencyjny jest również rodzajem mikroskopu optycznego, główna różnica polega na tym, że długość fali wzbudzenia obu jest inna. Określa to różnicę między mikroskopem fluorescencyjnym a zwykłym mikroskopem optycznym pod względem budowy i zastosowania.
Mikroskopia fluorescencyjna jest podstawowym narzędziem w cytochemii immunofluorescencyjnej. Składa się z głównych elementów, takich jak źródło światła, system płyt filtracyjnych i układ optyczny. Polega na wykorzystaniu określonej długości fali światła do wzbudzenia próbki w celu wyemitowania fluorescencji oraz do obserwacji obrazu fluorescencyjnego próbki poprzez wzmocnienie układu soczewki obiektywu i okularu.
