Opisać szczegółowo etapy selekcji i metody sond fluorescencyjnych do mikroskopii konfokalnej
W eksperymentach z mikroskopami konfokalnymi niektóre wskaźniki eksperymentalne można wykryć za pomocą autofluorescencji samej próbki lub substancji egzogennych, ale większość badanych substancji nie ma mierzalnej fluorescencji i musi być wyznakowana sondami fluorescencyjnymi. Posiada mierzalny sygnał fluorescencyjny. Jak więc wybrać sondy fluorescencyjne do mikroskopii konfokalnej?
1. Określ wskaźniki do przetestowania zgodnie z celem eksperymentu
Po określeniu wskaźnika detekcji określany jest również zakres doboru sond fluorescencyjnych. Można zauważyć, że wybór sondy fluorescencyjnej do zastosowania w eksperymencie zależy od celu eksperymentu. Na przykład, jeśli celem eksperymentu jest badanie zmian jonów wapnia w kardiomiocytach podczas migotania przedsionków, można stwierdzić, że badaną substancją są jony wapnia w kardiomiocytach, a zakres doboru sond fluorescencyjnych jest ograniczony do sondy jonów wapnia, które mogą znakować żywe komórki. Igła.
2. Określ zakres dostępnych sond fluorescencyjnych
W przypadku nowych substancji eksperymentalnych lub wskaźników, jeśli celem eksperymentu nie jest badanie nowych sond fluorescencyjnych, można zastosować dojrzałe sondy i metody znakowania. Typ lub zakres sond fluorescencyjnych, które mogą oznaczać badaną substancję, można określić, przeszukując autorytatywną literaturę lub katalogi produktów znanych firm odczynników w kraju i za granicą.
3. Zbadać, czy charakterystyka sondy fluorescencyjnej spełnia wymagania dotyczące przygotowania próbek fluorescencyjnych
Charakterystyka sond fluorescencyjnych bezpośrednio wpływa na znakowanie próbek i wyniki eksperymentów. Dlatego przed wyborem sond fluorescencyjnych i znakowaniem próbek w eksperymencie konieczne jest pełne zrozumienie ich charakterystyki fluorescencyjnej. Właściwości badanych sond fluorescencyjnych obejmują:
1. Charakterystyka reakcji sond świetlnych i próbek
2. Czułość i intensywność fluorescencji sond fluorescencyjnych
3. Właściwości spektralne próbek znakowanych sondami fluorescencyjnymi
4. Stabilność fluorescencji
5. Interakcja między wielokrotną fluorescencją w próbce
