Rozszerzanie korzyści z multiphotonowej mikroskopii skanowania laserowego o
Mikroskop multiphotonowy skanujący laserowy jest znaczącą poprawą mikroskopii optycznej, objawiającą się głównie zdolnością do obserwacji głębokich struktur żywych komórek, stałych komórek i tkanek oraz uzyskiwania wyraźnych i ostrych struktur wielowarstwowych planetów Z, a mianowicie plastry optycznej, które można zastosować do konstruowania trójwymiarowych struktur stałych próbek. Mikroskop konfokalny wykorzystuje źródło światła laserowego, które jest rozszerzone w celu wypełnienia całej płaszczyzny ogniskowej obiektywu obiektywnego, a następnie zbliżonego do bardzo małych punktów na płaszczyźnie ogniskowej próbki przez system soczewki obiektywu. Zgodnie z otworem numerycznym obiektywu obiektywnego średnica jasnego punktu oświetlenia wynosi około 0. 25-0. 8 μm, a głębokość wynosi około {6}}. 5-1. 5 μm. Rozmiar punktu konfokalnego jest określony przez projekt mikroskopu, długość fali laserowej, charakterystykę obiektywu, ustawienia stanu jednostki skanowania i właściwości próbek. Zakres oświetlenia i głębokość mikroskopu polowego są duże, podczas gdy oświetlenie mikroskopu konfokalnego koncentruje się na punkcie centralnym na płaszczyźnie ogniskowej. Podstawową zaletą mikroskopii konfokalnej jest to, że może ona wykonywać drobne odcinki optyczne na grubych próbkach fluorescencyjnych (do 5 0 μm lub więcej), o grubości około 0,5 do 1,5 μm. Serię optycznych obrazów plasterek można uzyskać, przesuwając próbkę w górę i w dół za pomocą silnika krokowego z osi Z mikroskopu. Zbiór informacji obrazu jest kontrolowany w płaszczyźnie * *, bez zakłóceń z sygnałów emitowanych z innych pozycji na próbce. Po usunięciu wpływu fluorescencji tła i zwiększeniu stosunku sygnału do szumu, kontrast i rozdzielczość obrazów konfokalnych są znacznie poprawione w porównaniu z tradycyjnymi obrazami fluorescencyjnymi pola. W wielu próbkach skomplikowane komponenty strukturalne przeplatają się, tworząc złożone systemy, ale gdy można zebrać wystarczającą ilość sekcji optycznych, możemy użyć oprogramowania do rekonstrukcji w trzech wymiarach. Ta metoda eksperymentalna była szeroko stosowana w badaniach biologicznych w celu wyjaśnienia złożonych relacji strukturalnych i funkcjonalnych między komórkami lub tkankami.
