Metoda liczenia bezpośredniego w mikroskopie mikrobiologicznym
Etapy eksperymentalne (metoda liczenia bezpośredniego pod mikroskopem mikrobiologicznym)
1. Rozcieńczanie
Odpowiednio rozcieńczyć zawiesinę drożdży piwnych. Jeśli roztwór bakterii nie jest stężony, nie ma potrzeby jego rozcieńczania.
2. Sala badań mikroskopowych i zliczania
Przed dodaniem próbek należy wykonać badanie mikroskopowe komory zliczającej płytki liczącej. Jeśli jest brud, należy go oczyścić przed zliczeniem.
3. Dodaj próbki
Przykryj czystą i suchą płytkę do liczenia krwinek szkiełkiem nakrywkowym, a następnie za pomocą sterylnego zakraplacza z cienką końcówką upuść małą kroplę (nie za dużo) rozcieńczonego roztworu drożdży z krawędzi szkiełka nakrywkowego. Pozwól roztworowi bakterii przedostać się do komory zliczania wzdłuż szczeliny poprzez przenikanie kapilarne. Generalnie komorę zliczającą można napełnić roztworem bakterii. Uważaj, aby nie wygenerować bąbelków.
4. Liczenie mikroskopowe
Po 5 minutach odpoczynku umieść płytkę do liczenia krwinek na stoliku mikroskopu, najpierw użyj mikroskopu o małej mocy, aby zlokalizować pomieszczenie do liczenia, a następnie przełącz się na mikroskop o dużej mocy do liczenia. Jeżeli przed zliczeniem okaże się, że roztwór bakterii jest za gęsty lub za rzadki, przed zliczeniem należy ponownie skorygować rozcieńczenie. Ogólny wymóg dotyczący rozcieńczenia próbki stanowi, że na małą komórkę powinno przypadać około 5-10 ciał bakteryjnych. Wybierz 5 komórek z każdego pomieszczenia do liczenia (opcjonalnie 4 rogi i komórki środkowe) do zliczenia. Grzybnia znajdująca się na linii siatki generalnie liczy się tylko na górnej i prawej linii. Jeżeli drożdże wykiełkują, a pączek osiągnie połowę wielkości komórki macierzystej, przeprowadza się dwa zliczenia bakterii. Aby policzyć próbkę, należy obliczyć zawartość bakterii w próbce na podstawie wartości uzyskanych z dwóch komór liczących.
5. Wyczyść tablicę do liczenia krwinek
Po użyciu przepłucz tablicę do liczenia krwinek słupem wody na kranie z wodą. Do mycia nie używaj twardych przedmiotów. Po umyciu wysuszyć samodzielnie lub suszarką do włosów. Badanie mikroskopowe i obserwacja, czy w każdej małej komórce znajdują się pozostałości ciał bakteryjnych lub inne osady. Jeśli nie jest czysty, należy go wielokrotnie prać, aż będzie czysty.
