Budowa i główne elementy mikroskopu fluorescencyjnego
(1) Źródło światła
Obecnie jako źródło światła powszechnie stosuje się ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową o mocy 200 W. Wykonany jest ze szkła kwarcowego, ma kulisty kształt pośrodku i wypełnioną wewnątrz pewną ilością rtęci. Podczas pracy wyładowanie pomiędzy dwiema elektrodami powoduje odparowanie rtęci, a ciśnienie wewnątrz kuli gwałtownie wzrasta. Kiedy rtęć całkowicie wyparuje, może osiągnąć 50-70 standardowe ciśnienie atmosferyczne, co zwykle zajmuje około 5-15 minut. Luminescencja ultrawysokoprężnych lamp rtęciowych jest wynikiem wyładowania pomiędzy elektrodami, które w sposób ciągły dysocjuje i redukuje cząsteczki rtęci oraz emituje fotony. Emituje silne światło ultrafioletowe i niebieskofioletowe, które jest wystarczające do wzbudzenia różnych substancji fluorescencyjnych, dlatego jest szeroko stosowany w mikroskopach fluorescencyjnych.
Ultrawysokoprężne lampy rtęciowe emitują również dużą ilość energii cieplnej. Dlatego pomieszczenie z lampami musi mieć dobre warunki odprowadzania ciepła, a temperatura środowiska pracy nie powinna być zbyt wysoka.
Nowa ultrawysokociśnieniowa lampa rtęciowa nie wymaga wysokiego napięcia do zapalenia się już na wczesnym etapie użytkowania. Po pewnym czasie użytkowania należy go uruchomić pod wysokim napięciem (około 15000V). Po uruchomieniu napięcie robocze utrzymuje się na ogół na poziomie 50-60 V, a prąd roboczy wynosi około 4 A. Średnia żywotność ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej o mocy 200 W wynosi około 200 godzin przy każdorazowym użytkowaniu przez 2 godziny. Im krótszy czas pracy, tym krótsza żywotność. Jednorazowe użycie tylko na 20 minut powoduje zmniejszenie żywotności o 50%. Dlatego staraj się minimalizować liczbę uruchomień podczas użytkowania. Wydajność świetlna żarówki stopniowo maleje w trakcie użytkowania. Po zgaśnięciu kontrolki należy poczekać na ochłodzenie przed ponownym uruchomieniem. Po zapaleniu żarówki nie należy jej od razu wyłączać, aby uniknąć niepełnego odparowania rtęci i uszkodzenia elektrody. Ogólnie rzecz biorąc, należy poczekać 15 minut. Ze względu na wysokie ciśnienie i silne promieniowanie ultrafioletowe ultrawysokociśnieniowej lampy rtęciowej, żarówkę należy umieścić w komorze lampy przed zapaleniem, aby uniknąć obrażeń oczu i eksplozji podczas pracy.
Obwód źródła światła rtęciowego o ultrawysokociśnieniowym (100 W lub 200 W) i jego elementy, w tym transformacja napięcia, tłumienie prądu i rozruch. W pomieszczeniu lampy zastosowano system regulacji środka światła żarówki, w którym za żarówką zamontowany jest odbłyśnik wklęsły platerowany aluminium, a z przodu soczewka zbierająca światło.
Produkowana w kraju ultrawysokociśnieniowa lampa rtęciowa GCQ-200 ma dobre parametry i może zastąpić importowane żarówki, takie jak HBO-200, o średniej żywotności ponad 200 godzin i stosunkowo niskiej cenie.
Proste i przenośne źródło światła fluorescencyjnego z bromowo-wolframem o wysokiej temperaturze barwowej, opracowane w Chinach, o małej objętości, niewielkiej wadze, małej mocy, podwójnym zastosowaniu prądu przemiennego i stałego (z wbudowanym zasilaczem prądu stałego), łatwe do przenoszenia i wygodne w użyciu , został promowany i stosowany.
(2) System filtrowania kolorów
System filtrów barwnych jest ważną częścią mikroskopu fluorescencyjnego i składa się z płytki filtra wzbudzenia i płytki filtra kompresji. Model płytki filtrującej jest często niespójny wśród producentów. Nazwy płytek filtracyjnych na ogół pochodzą od podstawowego odcienia koloru, przy czym pierwsza litera reprezentuje odcień koloru, druga litera oznacza szkło, a liczba reprezentuje charakterystykę modelu. Mikroskop Olimpu
(3) Obiektyw
Można stosować różne soczewki obiektywowe, ale w przypadku fluorescencji odpowiednie są soczewki achromatyczne ze względu na ich wyjątkowo niską samofluorescencję i transmitancję (zakres długości fal). Ze względu na to, że jasność fluorescencji obrazu w polu widzenia mikroskopu jest wprost proporcjonalna do kwadratu współczynnika apertury obiektywu i odwrotnie proporcjonalna do jego powiększenia, w celu poprawy jasności obrazu fluorescencyjnego należy zastosować soczewkę obiektywową należy zastosować większy współczynnik apertury. Zwłaszcza przy dużym powiększeniu jego wpływ jest bardzo znaczący. Dlatego w przypadku próbek o niewystarczającej fluorescencji należy zastosować obiektyw o dużej aperturze w połączeniu z okularem możliwie najniższym (4 x, 5 x, 6,3 x itp.).
(4) Lustro odblaskowe
Warstwa odblaskowa reflektora jest zwykle pokryta aluminium, ponieważ aluminium pochłania mniej światła ultrafioletowego i widzialnego w obszarze niebieskofioletowym, z odbiciem ponad 90%, podczas gdy srebro odbija tylko 70%; Generalnie stosuje się odbłyśniki płaskie.
(5) Lustro punktowe
Koncentrator zaprojektowany i wykonany specjalnie do mikroskopii fluorescencyjnej wykonany jest ze szkła kwarcowego lub innego szkła przepuszczającego światło ultrafioletowe. Istnieją dwa typy spotterów ciemnego pola z odrębnym polem widzenia. Dostępny jest także koncentrator fluorescencji różnicowej.
(6) Urządzenie spadającego światła
Nowy typ urządzenia padającego światła odbija części o krótszej długości fali (ultrafiolet i fioletowo-niebieski) ze źródła światła do filtra spektrofotometru interferencyjnego ze względu na właściwości powłoki na filtrze. Gdy filtr jest skierowany w stronę źródła światła pod kątem 45 stopni. Po przechyleniu jest skierowany pionowo w stronę soczewki obiektywu i w stronę preparatu przez soczewkę obiektywu, powodując wzbudzenie preparatu. W tym momencie soczewka obiektywu działa bezpośrednio jako kondensor. Jednocześnie długie części filtra (zielony, żółty, czerwony itp.) są dla filtra przezroczyste, dzięki czemu nie odbijają się w kierunku obiektywu. Filtr działa jak płyta filtra wzbudzenia, a ponieważ fluorescencja próbki występuje w obszarze długich fal światła widzialnego, można ją zaobserwować przez filtr i dotrzeć do obiektywu. Jasność obrazu fluorescencyjnego wzrasta wraz ze wzrostem powiększenia i jest silniejsza niż źródło światła przechodzącego przy dużym powiększeniu. Oprócz swojej funkcji jako przepuszczalnego źródła światła, bardziej nadaje się do bezpośredniej obserwacji nieprzezroczystych i półprzezroczystych próbek, takich jak grube płytki, membrany filtracyjne, kolonie, próbki do hodowli tkankowych itp. W ostatnich latach nowo opracowane mikroskopy fluorescencyjne często używaj urządzeń ze światłem padającym, znanych jako mikroskopy fluorescencyjne ze spadającym światłem.
