Korzystanie z mikroskopii fluorescencyjnej: techniki i umiejętności
Parametry techniczne mikroskopu fluorescencyjnego 1. Okular szerokokątny 2. Obiektyw achromatyczny 3. Konwerter soczewek z czterema otworami 4. Urządzenie epifluorescencyjne System wzbudzenia niebieskiego (B) zielonego (G) 100W lampa rtęciowa 5. Współosiowy mechanizm regulacji ostrości zgrubnej i precyzyjnej: regulacja Zakres ostrości: 15mm Wartość siatki mikroruchów: 0.002mm 6. Dwuwarstwowy stół mechaniczny Zakres ruchu wzdłużnego: 70mm Zakres ruchu bocznego: 50mm
Użyj metody umiejętności
(1) Zjeżdżalnia szklana
Grubość szkiełka powinna wynosić od 0,8 do 1,2 mm. Zbyt gruby preparat z jednej strony pochłonie więcej światła, az drugiej strony światło wzbudzenia nie może być skoncentrowane na preparacie. Szkiełka muszą być gładkie, jednolitej grubości i wolne od oczywistej autofluorescencji. Czasami stosuje się szkiełka kwarcowe.
(2) Szkło nakrywkowe
Grubość szkiełka nakrywkowego wynosi około 0,17 mm, gładkie. W celu wzmocnienia światła wzbudzającego można również zastosować interferencyjne szkło nakrywkowe, czyli specjalne szkło nakrywkowe pokryte kilkoma warstwami substancji (np. fluorescencja idzie gładko. Wzbudzające światło jest przepuszczane i odbijane, a odbite światło wzbudzające pobudza preparat.
(3) Próbka
Plasterki tkanki lub inne próbki nie powinny być zbyt grube. Jeśli jest zbyt gruba, większość światła wzbudzenia zostanie pochłonięta w dolnej części preparatu, podczas gdy górna część obserwowana bezpośrednio przez obiektyw nie będzie w pełni wzbudzona. Ponadto nakładanie się komórek lub pokrycie zanieczyszczeń wpływają na ocenę.
(4) Środek mocujący
Gliceryna jest powszechnie stosowana jako środek montażowy, który nie może mieć autofluorescencji, jest bezbarwny i przezroczysty, a jasność fluorescencji jest jaśniejsza przy pH 8.{1}},5 i nie jest łatwa do szybkiego wyblaknięcia. Dlatego jako środek utrwalający powszechnie stosuje się równą mieszaninę glicerolu i 0,5 mol/l roztworu buforu węglanowego o pH od 9, {6}} do 9,5.
(5) olej lustrzany
Zasadniczo podczas obserwacji preparatów za pomocą mikroskopów fluorescencyjnych ciemnego pola i soczewek immersyjnych należy stosować olejek immersyjny. Najlepiej używać specjalnego niefluorescencyjnego olejku immersyjnego. Zamiast tego można również zastosować powyższą glicerynę, a także płynną parafinę, ale współczynnik załamania światła jest niski, co ma niewielki wpływ na jakość obrazu. Wpływ.
