Zalety i wady laserowej mikroskopii skaningowej
Zalety są następujące:
1. Wzbudzone światłem czerwonym lub podczerwonym, rozpraszanie światła jest małe (rozpraszanie małych cząstek jest odwrotnie proporcjonalne do czwartej potęgi długości fali).
2. Nie ma potrzeby stosowania otworków, które mogą zebrać więcej rozproszonych fotonów z przekroju obrazowania.
3. Otwory nie potrafią rozróżnić rozproszonych fotonów emitowanych z obszarów nieostrych lub ogniskowych, a multifotony mają lepszy stosunek sygnału do szumu w głębokim obrazowaniu.
4. Światło ultrafioletowe lub widzialne stosowane do wzbudzenia pojedynczych fotonów jest łatwo absorbowane i tłumione przez próbkę, zanim wiązka dotrze do płaszczyzny ogniskowej, co utrudnia wzbudzenie głębokich warstw.
5. Podczas obserwacji pod mikroskopem biologicznym należy przede wszystkim zadbać o to, aby nie uszkodzić aktywnego stanu samego organizmu oraz utrzymać cyrkulację wody, stężenia jonów, tlenu i składników odżywczych. W zakresie obserwacji światła zarówno energia cieplna, jak i fotonowa musi mieścić się w dawce napromieniowania, a energia świetlna nie uszkadza komórek.
6. Mikroskopia wielofotonowa ma również wiele zalet. Pod względem rozdzielczości trójwymiarowej, inwazji na głębokość, wydajności rozpraszania, światła tła, stosunku sygnału do szumu, kontroli itp. mikroskopy laserowe mają niezrównane lub lepsze właściwości, których nie posiadały poprzednie mikroskopy laserowe.
Wielofotonowa konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa została rozszerzona na różne dziedziny badań i zastosowań. Może przeprowadzać trójwymiarową nieniszczącą obserwację próbek w ich naturalnym stanie oraz poprawiać rozdzielczość i stosunek sygnału do szumu systemu. Wykorzystując zmiany właściwości materiału po wzbudzeniu wieloma fotonami, można również uzyskać trójwymiarowe przechowywanie danych o wysokości i trójwymiarowe mikroprzetwarzanie w dowolnym kierunku, co ma wysoką wartość aplikacyjną. Można sądzić, że wraz z dalszym rozwojem mechanicznych, materiałowych oraz technologie laserowe związane z wielofotonową mikroskopią konfokalną, wielofotonowa konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa będą miały większy rozwój i szersze zastosowania
Wady są następujące:
1. Tylko do obrazowania fluorescencyjnego.
2. Jeżeli próbka zawiera chromofory, które mogą absorbować światło wzbudzające, np. pigmenty, próbka może ulec uszkodzeniu termicznemu.
3. Rozdzielczość jest nieznacznie zmniejszona, chociaż można ją poprawić, wykorzystując jednocześnie małe otwory konfokalne, spowoduje to utratę sygnału.
4. Ze względu na ograniczenia drogich ultraszybkich laserów koszt wielofotonowych mikroskopów skaningowych jest stosunkowo wysoki.
