Zastosowanie i zastosowanie zasad mikroskopu fluorescencyjnego
Zasady i cechy strukturalne mikroskopów fluorescencyjnych: Mikroskopy fluorescencyjne wykorzystują punktowe źródło światła o dużej wydajności świetlnej do emitowania światła o określonej długości fali (takiego jak światło ultrafioletowe 3650 cali lub światło fioletowo-niebieskie 4200 cali) przez system filtrów barwnych jako światło wzbudzające wzbudzić fluorescencję w próbce. Gdy substancja wyemituje fluorescencję o różnych kolorach, obserwuje się ją przez powiększenie obiektywu i okularu. W ten sposób na silnie kontrastowym tle, nawet jeśli fluorescencja jest bardzo słaba, jest łatwa do zidentyfikowania i charakteryzuje się dużą czułością. Stosowany jest głównie do badania struktury i funkcji komórek, a także składu chemicznego. Podstawowa konstrukcja mikroskopu fluorescencyjnego składa się ze zwykłego mikroskopu optycznego oraz niektórych akcesoriów (takich jak źródło światła fluorescencyjnego, filtr wzbudzenia, dwukolorowy rozdzielacz wiązki, filtr blokujący itp.). Fluorescencyjne źródło światła — zazwyczaj wykorzystuje ultrawysokociśnieniową lampę rtęciową (50 do 200 W), która może emitować światło o różnych długościach fal, ale każda substancja fluorescencyjna ma długość fali wzbudzenia, która wytwarza najsilniejszą fluorescencję, dlatego też filtr wzbudzenia (zazwyczaj są filtry wzbudzenia ultrafioletowego, fioletowego, niebieskiego i zielonego), które pozwalają tylko światłu wzbudzonemu o określonej długości fali przejść i oświetlić próbkę, pochłaniając jednocześnie całe inne światło. Każda substancja po naświetleniu światłem wzbudzającym emituje w bardzo krótkim czasie widzialną fluorescencję o długości fali większej niż długość fali napromieniowania. Fluorescencja jest specyficzna i na ogół słabsza niż światło wzbudzające. Aby zaobserwować specyficzną fluorescencję, za soczewką obiektywu wymagany jest filtr blokujący (lub tłumiący). Ma dwie funkcje: jedna polega na pochłanianiu i blokowaniu przedostawania się światła wzbudzającego do okularu, aby uniknąć zakłócenia fluorescencji i uszkodzenia oczu; drugim jest wybranie i umożliwienie przejścia określonej fluorescencji w celu pokazania określonego koloru fluorescencji. Obydwa filtry należy wybrać i używać razem.
