Funkcje każdego filtra w mikroskopie fluorescencyjnym
Najbardziej krytycznym problemem w mikroskopii fluorescencyjnej jest połączenie filtrów optycznych. Zarówno filtr wzbudzenia, jak i filtr ekranujący muszą być odpowiednie do obserwowanego materiału fluorescencyjnego i do siebie dopasowane. W przypadku niektórych specyficznych zastosowań błędy w doborze filtrów mogą prowadzić do nieporozumień, a nawet błędnych wyników. Osiągnięcia technologii mikroskopii fluorescencyjnej są nierozerwalnie związane z-wysokiej jakości filtrami i sprytnie dobranymi grupami filtrów. Istnieje kilka rodzajów filtrów do mikroskopii fluorescencyjnej.
1. Filtr pochłaniający ciepło
Filtr pochłaniający ciepło jest filtrem niezbędnym, aby zapobiec uszkodzeniu układu optycznego przez promieniowanie cieplne w widmie źródła światła. Wczesne zaawansowane mikroskopy były wyposażone w butelki w kształcie bębna, w których mogła znajdować się woda destylowana jako urządzenie pochłaniające ciepło. Nowoczesne wielkoskalowe-mikroskopy badawcze są wyposażone w szklane filtry pochłaniające ciepło w skrzynkach świetlnych lub komorach lamp ze źródłami światła, które są przezroczystymi i lekko żółtymi taflami szkła. Filtry Leitz KG1 (2 mm) i BG38 (4 mm) mogą przepuszczać prawie wszystkie widma światła ultrafioletowego i widzialnego, przy współczynniku przepuszczalności światła do 98%. Pochłania jedynie selektywnie promieniowanie fototermiczne w podczerwieni.
2. Filtr wzbudzenia
Filtry wzbudzenia mogą selektywnie absorbować linie widmowe o długich falach i przepuszczać jedynie światło ultrafioletowe. Filtry światła fioletowego, niebieskiego i zielonego to filtry wzbudzenia. Zeiss, Reichert, seria B firmy Olympus, seria G, seria BG, seria UG firmy Shott, seria H, G, BP firmy Opton, seria BP firmy Leitz i inne filtry optyczne są filtrami wzbudzenia.
3. Filtr blokujący
Filtr blokujący to filtr, który selektywnie pochłania linie widmowe fal krótkich i promienie podczerwone, jednocześnie umożliwiając oglądanie fal dłuższych. Jego zadaniem jest umożliwienie obserwatorowi zobaczenia fluorescencji wzbudzonej przez kontrolowany obiekt, przy jednoczesnej ochronie rogówki obserwatora przed uszkodzeniem przez promieniowanie UV.
4. Filtr separacji kolorów
Filtr separacji kolorów to zwierciadło filtrujące, które odbija światło wzbudzenia na kontrolowany obiekt, powodując, że obiekt emituje fluorescencję, a następnie przekazuje fluorescencję do okularu. Ten typ filtra można stosować wyłącznie w kondensatorze światła padającego, natomiast mikroskop fluorescencyjny w świetle przechodzącym nie wymaga separacji kolorów.
5. Filtr zakłóceń
Filtr interferencyjny to rodzaj-filtra wzbudzenia o wysokiej wydajności. Jest to filtr powstały w wyniku ułożenia kilku cienkich folii metalowych pomiędzy dwiema polerowanymi taflami szkła. Współczynnik załamania światła każdej cienkiej folii metalowej jest inny, dlatego linie widmowe o różnych długościach fal źródła światła oświetlającego są wielokrotnie odbijane na każdej folii metalowej. Niektóre linie widmowe o określonych długościach fal są eliminowane przez destrukcyjną interferencję, podczas gdy inne są wzmacniane przez interferencję addytywną i przepuszczane. Rezultatem jest filtr o wąskim spektrum transmisji i szerokości połowy piku wynoszącej zaledwie 6–20 nm. Przepuszczalność może osiągnąć 60% -70%.
