Wprowadzenie do zalet i wad wielofotonowego laserowego mikroskopu skaningowego
Zalety wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej:
1. Wzbudzone światłem czerwonym lub światłem podczerwonym, rozpraszanie światła jest małe, a rozpraszanie małych cząstek jest odwrotnie proporcjonalne do czwartej potęgi długości fali.
2. Więcej rozproszonych fotonów z sekcji obrazowania można zebrać bez porów.
3. Otwór nie jest w stanie rozróżnić rozproszonych fotonów emitowanych z obszaru nieostrego lub obszaru ostrości, a stosunek sygnału do szumu w obrazowaniu wielofotonowym w głębokich warstwach jest dobry.
4. Światło ultrafioletowe lub widzialne stosowane do wzbudzenia pojedynczego fotonu jest łatwo absorbowane i tłumione przez próbkę, zanim wiązka dotrze do płaszczyzny ogniskowej, a wzbudzenie głębokich warstw nie jest łatwe.
5. Podczas obserwacji pod mikroskopem biologicznym należy przede wszystkim zadbać o to, aby nie uszkodzić aktywnego stanu samego organizmu i utrzymać cyrkulację wody, stężenia jonów, tlenu i składników odżywczych. W przypadku obserwacji światła zarówno energia cieplna, jak i fotonowa musi mieścić się w ilości naświetlania, a energia świetlna nie spowoduje uszkodzenia komórek.
6. Mikroskopia wielofotonowa ma wiele zalet. Takie jak trójwymiarowa rozdzielczość, głęboka penetracja, wydajność rozpraszania, światło tła, stosunek sygnału do szumu, kontrola itp. mają cechy, których poprzednie mikroskopy laserowe nie miały lub nie mogły przekroczyć.
Wady wielofotonowej laserowej mikroskopii skaningowej:
1. Tylko do obrazowania fluorescencyjnego.
2. Jeżeli próbka zawiera chromofory pochłaniające światło wzbudzające, próbka może ulec uszkodzeniu termicznemu.
3. Rozdzielczość jest nieco zmniejszona. Chociaż można to poprawić, stosując jednocześnie aperturę konfokalną, sygnał jest tracony.
4. Ze względu na ograniczenia drogich ultraszybkich laserów koszt wielofotonowego mikroskopu skaningowego jest stosunkowo wysoki.
