Zasady i cechy strukturalne mikroskopii fluorescencyjnej
Mikroskop fluorescencyjny wykorzystuje wysoką skuteczność świetlną punktowego źródła światła poprzez system filtrowania kolorów w celu emitowania światła o określonej długości fali (takiej jak ultrafiolet 3650 lub fioletowo-niebieski 4200) jako światła wzbudzającego, wzbudzenie materiału fluorescencyjnego próbka emituje różne kolory fluorescencji, a następnie jest powiększana przez obiektyw i okulary w celu obserwacji. W ten sposób na silnie kontrastowym tle, nawet jeśli fluorescencja jest bardzo słaba, łatwo jest zidentyfikować wysoką czułość, stosowaną głównie do badania struktury i funkcji komórek oraz składu chemicznego. Podstawowa konstrukcja mikroskopu fluorescencyjnego składa się ze zwykłego mikroskopu optycznego oraz niektórych akcesoriów (takich jak źródło światła fluorescencyjnego, filtry wzbudzające, dwukolorowy separator wiązek i filtry blokujące itp.). Fluorescencyjne źródło światła - powszechnie stosowana ultrawysokociśnieniowa lampa rtęciowa (50-200W), która może emitować różne długości fal światła, ale każdy materiał fluorescencyjny ma najsilniejszą długość fali wzbudzenia fluorescencji, dlatego też konieczne jest dodanie filtrów wzbudzających (zwykle filtr wzbudzenia ultrafioletowego, fioletowego, niebieskiego i zielonego), dzięki czemu tylko pewna długość fali światła wzbudzenia poprzez napromieniowanie próbek, podczas gdy inne światło jest pochłaniane. Dlatego konieczne jest dodanie filtra wzbudzenia (zwykle filtrów wzbudzenia ultrafioletowego, fioletowego, niebieskiego i zielonego), tak aby tylko pewna długość fali światła wzbudzenia przechodziła przez próbkę, podczas gdy inne światło było pochłaniane. Kiedy każda substancja zostanie naświetlona światłem wzbudzającym, w bardzo krótkim czasie emituje widzialną fluorescencję o większej długości fali niż światło napromieniowane. Fluorescencja ma specyficzność, na ogół słabszą niż światło wzbudzające, aby móc obserwować specyficzną fluorescencję w obiektywie, dlatego konieczne jest dodanie filtra blokującego (lub tłumiącego).
Jego rola jest dwojaka:
Jednym z nich jest pochłanianie i blokowanie światła wzbudzenia w okularze, aby nie zakłócać fluorescencji i nie uszkodzić oczu.
Drugim jest wybranie i przepuszczenie specyficznej fluorescencji, pokazując specyficzny kolor fluorescencji. Należy wybrać i stosować oba typy filtrów w połączeniu.
