Zasady i charakterystyka strukturalna mikroskopów fluorescencyjnych
Mikroskop fluorescencyjny wykorzystuje wysoce wydajne punktowe źródło światła do emitowania określonej długości fali światła (takiej jak światło ultrafioletowe 3650 lub światło fioletowo-niebieskie 4200) poprzez system filtrów barwnych jako światło wzbudzające, które wzbudza substancje fluorescencyjne w próbce w celu wyemitowania różnych kolorów fluorescencji, a następnie obserwuje poprzez powiększenie soczewki obiektywu i okularu. Dzięki temu nawet przy słabej fluorescencji na mocnym tle jest łatwy do rozpoznania i charakteryzuje się dużą czułością. Stosowany jest głównie do badania struktury, funkcji i składu chemicznego komórek. Podstawowa struktura mikroskopu fluorescencyjnego składa się ze zwykłego mikroskopu optycznego i niektórych akcesoriów, takich jak fluorescencyjne źródło światła, filtr wzbudzenia, dwukolorowy rozdzielacz wiązki i filtr blokujący. Fluorescencyjne źródło światła - zwykle wykorzystuje ultra-wysokociśnieniowe lampy rtęciowe (50–200 W), które mogą emitować światło o różnych długościach fal, ale każda substancja fluorescencyjna ma długość fali światła wzbudzającego, która wytwarza najsilniejszą fluorescencję. Dlatego też należy dodać filtry wzbudzenia (zwykle filtry wzbudzenia ultrafioletowego, fioletowego, niebieskiego i zielonego), aby umożliwić przejście tylko światła wzbudzającego o określonej długości fali i napromieniowanie próbki, pochłaniając jednocześnie całe inne światło. Każda substancja po naświetleniu światłem wzbudzającym emituje w bardzo krótkim czasie widzialną fluorescencję o długości fali dłuższej niż długość fali napromieniania. Fluorescencja ma swoistość i jest na ogół słabsza niż światło wzbudzające. Aby zaobserwować specyficzną fluorescencję, za soczewką obiektywu należy umieścić filtr blokujący (lub tłumiący).
Jego funkcje są dwojakie: po pierwsze, pochłania i blokuje przedostawanie się światła wzbudzenia do okularu, aby uniknąć zakłócania fluorescencji i uszkodzenia oczu; po drugie, aby wybrać i umożliwić przejście określonej fluorescencji, wykazując określony kolor fluorescencyjny. Należy stosować kombinację dwóch typów filtrów.
