Przygotowanie i obserwacja próbek biologicznych dla mikroskopów elektronowych
Rozdzielczość mikroskopu zależy od długości fali użytego światła. Mikroskop elektronowy, który pojawił się w 1933 roku, osiągnął znacznie wyższą rozdzielczość niż mikroskop optyczny dzięki zastosowaniu jako źródła światła wiązek elektronów o długości fali znacznie krótszej niż światło widzialne. Różne źródła światła determinują również szereg różnic między mikroskopami elektronowymi i mikroskopami optycznymi.
W oparciu o różnice w zasadach obrazowania wiązek elektronów i sposobach, w jakie działają one na próbki, współczesne mikroskopy elektronowe rozwinęły się w wiele typów. Obecnie najczęściej stosowane są transmisyjne mikroskopy elektronowe i skaningowe mikroskopy elektronowe. Pierwsza ma całkowite powiększenie, które może wahać się od 1000 do 10000000 razy, podczas gdy druga ma całkowite powiększenie, które może zmieniać się od 20 do 300000 razy. Doświadczenie to dotyczy głównie przygotowania dwóch rodzajów próbek mikroskopowych, transmisyjnej mikroskopii elektronowej i skaningowej mikroskopii elektronowej.
2, Sprzęt
1. Szczep Escherichia coli jest skłonny.
2. Roztwór lub odczynnik: octan pentylu, stężony kwas siarkowy, bezwodny etanol, woda sterylna, 2% wodny roztwór fosfotungramianu sodu (pH 6,5-8,0), 0,3% roztwór poliwinyloformaldehydu (rozpuszczony w chloroformie), cytochrom c, octan amonu, plazmid pBR322.
3. Do instrumentów i innych narzędzi zaliczają się zwykłe mikroskopy optyczne, siatki miedziane, lejki porcelanowe, zlewki, szalki Petriego, sterylne zakraplacze, sterylne pęsety, szpilki, szkiełka szklane, płytki liczące, maszyny do powlekania próżniowego, suszarki do punktów krytycznych itp.
3, kroki operacyjne
(1) Przygotowanie i obserwacja próbek do transmisyjnej mikroskopii elektronowej
1. Obróbka siatki metalowej
Próbkę mikroskopu optycznego umieszcza się na szkiełku w celu obserwacji. Jednakże w zwierciadle transmisyjnym, ponieważ elektrony nie mogą przeniknąć przez taflę szklaną, jako nośnik można zastosować jedynie materiał siatkowy, powszechnie nazywany siatką nośną. Siatkę nośną można podzielić na różne specyfikacje ze względu na różne materiały i kształty, wśród których powszechnie stosowana jest siatka miedziana o oczkach 200-400 (liczba otworów). Siatkę miedzianą należy poddać obróbce przed użyciem, aby usunąć wszelkie zabrudzenia i utrzymać ją w czystości, w przeciwnym razie będzie to miało wpływ na jakość folii nośnej i klarowność zdjęć próbek. Siatkę miedzianą o oczkach 400 zastosowaną w tym doświadczeniu można poddać obróbce następującym sposobem: najpierw namoczyć i flotować w octanie pentylu przez kilka godzin, następnie kilkakrotnie przepłukać wodą destylowaną, a na koniec zanurzyć i wypuścić siatkę miedzianą w bezwodnym etanolu w celu odwodnienia. Jeżeli po zastosowaniu powyższych metod siatka miedziana nadal nie jest czysta, można ją namoczyć w rozcieńczonym stężonym kwasie siarkowym (1:1) przez 1-2 minuty lub gotować w 1% roztworze NaOH przez kilka minut, przepłukać kilkakrotnie wodą destylowaną, a następnie odwodnić w bezwodnym etanolu do późniejszego użycia.
